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一般来说, 不太了解液相的人会认为, 四元泵(Quaternary Pump)肯定比二元泵(Binary Pump)好啊, 因为四元泵可以同时走四个通道的流动相, 二元泵只能走两个。 这种理解不算全错, 但是光从”4>2”的纯数字的角度比较, 肯定是不能客观反映两种泵孰优孰劣的。
但在更深一步了解两种泵的原理结构以后, 我们一般更倾向于认为二元泵要优于四元泵, 原因是二元泵是基于高压混合的方式, 在流动相混合的时候更不容易产生气泡,压力更稳定。 如下图: 泵A(Pump Head A)和泵B(Pump HeaB)出来的流动相 在混合器(Mixing Chamber)里面混合的时候, 都是处于高压状态, 这时候,流动相对气体溶解度较高, 气体不容易从流动相中析出成气泡, 导致压力波动,流速不准,基线波动等种种问题。
而四元泵的混合, 是采取在泵前用比例阀(Gradient Proportion Valve)来混合的方式, 混合时流动相处于常压的状态, 这时候,流动相对气体的溶解度较低, 如果流动相中溶解的气体比较多的话, 在混合时就可能有小气泡形成, 导致压力波动等种种问题。 气泡永远是液相色谱的天敌。 所以说,四元泵一定要配脱气机, 先对流动相进行在线脱气, 才能用比例阀进行混合, 要不然很容易产生气泡。 而二元泵可以不用配脱气机就能在线混合, 运行梯度方法。
二元泵优于四元泵可不单单局限于高压混合的方式, 下面我们一起看看二元泵到底还”好在哪里”? 混合精确性 • 从上面的介绍可以看到, 两种泵的混合方式是完全不一样的。 二元泵相当的直观, 通过分别控制两个泵的流速,就能够准确控制两种流动相的比例。 比如在1ml/min的流速下, 要达到A:B两种流动相70/30的混合比例, 那就设置A泵流速0.7ml/min,B泵流速0.3ml/min就可以了。 当然这些都是系统和软件自动完成的。 只要做到泵流速准确,比例就能准确。
而四元泵通过比例阀来控制混合比例, 那比例阀又是如何工作的呢? 这可能知道的人就不多了。 一般来说, 比例阀是通过控制入口通道分别打开时间的长短来控制混合比例的。 举个例子可能更容易理解, 仍然是A:B两种流动相70/30的混合比例。 为了达到这个效果,B、C、D三个通道都关闭,A通道打开7ms, 这时候进入系统的都是A; 然后,A、C、D关闭,B通道打开3ms, 这时候进入系统的都是B。 这样就得到了70/30的流动相的比例。 大家能感觉出来, 进入系统的流动相其实是一段A、一段B这样的。 如果是四种流动相同时混合,出来的效果可能就是下面这个样子。 这种通过时间控制的方式, 在某个流动相比例比较低的时候,相对可能产生的误差会比较大。 延迟体积 • 二元泵流动相混合后, 经过混合器(Mixing Chamber)、压力传感器(Pressure sensor)、 阻尼器(Damper),冲洗阀(Purge Valve), 然后进入进样器。 反观四元泵, 流动相混合后要经过整个泵头 (包括主动入口阀、两个泵腔、出口阀、管路等等) 才能到达进样器。 (关于泵的具体构造,我们日后再聊)。 一般来说,我们把流动相从混合开始, 最后到达柱头这段体积叫延迟体积(delay volume)。 流动相梯度的变化要到色谱柱头, 才能够对分离产生影响, 所以有一定的延迟。延迟体积越大, 梯度的变化到达柱头的时间越长, 直接导致分析时间越长。
关于延迟体积, 我们以后会专门来一篇文章具体解释和分析。 但现在我们可以看到, 二元泵的设计,先天地决定了,其延迟体积远小于四元泵。 这就决定了在色谱分析时间要求很短的梯度方法中, 比如各种小粒径的色谱柱的快速分析方法,都采用二元泵。
不同品牌、类型的液相之间的延迟体积差异, 是方法转移后出现结果跟以前不一样了的最大的原因之一。 关于这一点,请关注我们的关于方法转移的后续文章。 检测器基线稳定性 • 由于四元泵采取的用时间控制比例的混合方式, 直接导致不同流动相是一段一段地进入后面的进样器、色谱柱,甚至是检测器。 假设仍然是A/B混合, 如果在检测波长254nm下面,A/B都是没有任何吸收的, 就算A/B没有混合地特别均匀,基线仍然是平稳的。 但是,如果检测波长低到210nm, 这时候A有了一点点吸收,B仍然没有吸收,或者A/B流动相吸收不一样。 这样一段A、一段B的流动相经过流通池,基线肯定也是上下波动的。 当然,四元泵也可以像二元泵后面在泵后面加上一个混合器, 但是本来就比较大的延迟体积,将变得更加不可忍受。 二元泵的混合方式决定了流动相的均匀程度要优于四元泵, 在低波长检测的一些方法的时候, 这种优势会直接导致基线稳定性要由于四元泵系统。 四元泵逆袭 • 看了这一大片的论述, 你是否觉得二元泵已经在于四元泵的竞争中完全胜出了呢? 事情总不是这么想当然,反而四元泵使用地更加普遍。 四元泵的相对优势,主要有几点: 1. 便宜啊。四元泵只需要一个泵头就能运行梯度条件, 注定成本和定价都由于二元泵。 在运行方法条件不是很苛刻的时候, 四元泵能达到跟二元泵一样的分析效果, 而价格可能要便宜30%以上。
2. 还是便宜啊。后期的维修保养成本便宜, 两个泵头的二元泵,基本单向阀、密封圈等等数量直接翻倍, 故障率和维修成本肯定高于四元泵。
3. 方便啊。 因为相对便宜,所以市场保养量大, 导致N多的标准方法都是在四元泵系统下开发的, 很多方法拿下来就能直接用。 如果你用二元泵, 不好意思,有时候方法转移起来可能会碰到一些问题。
4. 回到最初我们讲的,毕竟四还是大于二的。 在偶尔碰到一些要求三相混合的分(qi)析(pa)方法, 二元泵就直接悲剧了。 说简单点,冲柱子都不用换瓶子。
所以,下次碰到别人问你这个问题的时候, 你该知道如何专业地回答了吧。 当然,如果你不想像我一样浪费这么多口水, 那就说:“咳,都差不多吧,用啥不是用啊,你说是吧,哥……” 版权声明:本文版权属于色谱学堂(chromclass.com)所有,未经允许,禁止转载和摘编。如有需要,请联系[email protected] 。 |
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