阴性:伪狂犬病毒通用型（PRV

伪狂犬病毒通用型（PRV-gH）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）（狂犬病毒抗体检测试剂盒）

伪狂犬病毒通用型（PRV-gH）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）

通用称号：伪狂犬病毒通用型（PRV-gH）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）

Name ：Pseudorabies Virus gH gene Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】50T/盒

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)又称猪疱疹病毒Ⅰ型、感染性延髓麻木病毒、奇痒症病毒、奥叶兹基氏病病毒。是惹起牛、羊、猪、犬以及猫等多种牲畜以及家养植物发烧、奇痒(猪除了外)及脑脊髓炎为次要病症的疱疹病毒[1]。猪是伪狂犬病的唯-一天然宿主，对于其风险年夜。可致怀胎母猪流产，产逝世胎及胎儿干尸化。对于初生仔猪则惹起神经病症，呈现活动平衡，麻木，衰竭出生，病逝世率 100%。成年猪多呈隐性传染，但可惹起呼吸道病症[2]。病猪、带毒猪及带毒鼠类是本病的次要感染源，病毒次要从病猪的鼻排泄物、唾液、乳汁以及尿中扫除，有的带毒猪可继续排毒一年。

本试剂盒应用及时荧光 PCR 道理，检测伪狂犬病毒，对于伪狂犬病毒惹起的疾病及其并发症的诊断及疗效评

估有紧张指点意思。

本试剂盒采纳 TaqMan 探针法及时荧光 PCR 技能，计划一对于伪狂犬病病毒通用型特同性引物，分离一条特同性探针，用荧光 PCR 技能对于伪狂犬病病毒通用型的 DNA 停止体外扩增检测，用于临床上对于可疑传染者的病原学诊断。

包装规格

50T/盒

PRV-gH 反响液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

PRV-gH 阴性质控品

50μL ×1 管

阳性质控品

250μL ×1 管

阐明：差别批号的试剂盒组分不成交互运用。

-20℃±5℃，避光保管、运输、重复冻融次数没有超越 5 次，无效期 12 个月。

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

病逝世或者扑杀的猪，取脑、淋凑趣、脾脏、肺脏等构造；待检活猪，用棉拭子取鼻腔排泄物、唾液、乳汁等，   置于 50%甘油心理盐水中，或者用打针器取血 5mL。

上述标本短时间内可保管于-20℃，临时保管可置-70℃，但没有能超越 6 个月，标本输送应采纳 2~8℃冰袋运输， 严禁重复冻融。

1. 样品处置（样本处置区）

1.1 样本前处置

构造样品：每份构造辨别从 3 个差别的地位称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0. 5g 于研磨器中研磨，参加

1.5mL 心理盐水后持续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；排泄物棉拭子间接取 100μL 提取；血液取血清 100μL 提取。

引荐采纳优利科（上海）性命迷信无限公司消费的核酸提取或者纯化试剂（磁珠法或者离心柱法）停止核酸提取，请依照    试剂阐明书停止操纵。

依据待检测样本总数，设所需求的 PCR 反响管管数为 N(N=样本数+1 管阳性比较+1 管阴性比较；反响管数每满 10 份，多配制 1 份)，单个测试反响液系统配制以下表：

试剂

PRV-gH 反响液

酶液

用量（样本数为 N）

20μL

1μL

将混淆好的测试反响液分装到 PCR 反响管中，21μL/管。

将步调 1 提取的核酸、阴性质控品、阳性质控品各取 4μL，辨别参加响应的反响管中，盖好管盖，混匀，长久离心。

4.1 将待检测反响管置于荧光定量 PCR 仪反响槽内；

4.2 配置好通道、样品信息，反响系统配置为 25μL；

荧光通道挑选： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿挑选

ROX 参比荧光，挑选 None 便可。

4.3 引荐轮回参数配置：

步调

轮回数

温度

工夫

搜集荧光旌旗灯号

1

1 cycle

95℃

10min

否

2

40 cycles

94℃

15sec

否

55℃

30sec

是

5.1 后果剖析前提设定

配置 Baseline 以及 Threshold：普通间接按呆板主动剖析的后果剖析，当曲线呈现全体歪斜时，依据剖析后图象调理 Baseline 的 start 值(普通可正在 3~15 范畴内调理)、stop 值(普通可正在 5~20 范畴内调理)，和 Threshold 的 Value值(高低拖动阈值线至高于阳性比较)，从头剖析后果。

阴性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有分明的指数增加曲线；

可疑：检测通道 35

阳性：样本检测后果 Ct 值>38 或者无 Ct 值。

阳性质控品：Ct>38 或者无 Ct 值表现；

阴性质控品：扩增曲线有分明指数发展期，且 Ct 值≤32；以上前提应同时满意，不然尝试视为有效。

1. 样本检测后果与样本搜集、处置、输送和保管品质无关；

2. 样本提取进程中没有把持好穿插净化，会呈现假阴性后果；

3. 阴性比较、扩减产物走漏，会招致假阴性后果；

4. 病原体正在盛行进程中基因渐变、重组，会招致假阳性后果；

5. 差别的提取办法存正在提取服从差别，会招致假阳性后果；

6. 试剂运输，保管不妥或者试剂配制禁绝确惹起的试剂检测效力降低，呈现假阳性或者定量检测禁绝确的后果；

7. 本检测后果仅供参考，如须确诊请分离临床病症和其余检测手腕。

1. 一切操纵严厉依照阐明书停止；

2. 试剂盒内各类组分运用前应天然消融，完整混匀并长久离心；

3. 反响液应避光保管；

4. 反响中只管即便防止气泡存正在，管盖需盖紧；

5. 运用一次性吸头、一次性手套以及各区公用任务服；

6. 样本处置、试剂配制、加样需正在差别区停止，以避免穿插净化；

7. 尝试终了后用 10%次氯酸或者 75%酒精或者紫外灯处置任务台以及移液器；

8. 试剂盒里一切物品应视为净化物看待，并依照《微生物生物医学尝试室生物平安公例》停止处置。

[1] 娄拙劣，杜伟贤．伪狂犬病盛行概略及猪场防制战略[J]．中国植物检疫，1999，16（5）：43－45.

[2] 殷震，刘景华．植物病毒学[M]．北京：迷信出书社，1997.

[3] 国度品质监视查验检疫总局.GB/T 35911-2018 伪狂犬病病毒荧光 PCR 检测办法.[S].