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酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)是一种基于抗原抗体之间专一键结特性的分子实验。结合在固体承载物(通常为塑胶孔盘)上的抗原或抗体仍然保持蛋白质的完整天然结构,利用键结机制,再配合酶催化的呈色反应,不但可以检测抗原或抗体的存在,而且可以利用颜色深浅来进行定量。根据键结机制的不同,ELISA可设计出各种不同类型的检测方式,小编在这里着重给大家介绍两种常用的方法:间接法(indirect)和三明治法(sandwich)。 间接法(Indirect ELISA) 间接法跟直接法比较的的好处就是敏感度加大,因为单一的一次抗体有很多二次抗体结合。而且实验成本比三明治法较低,因为只有一种一次抗体。 三明治法(Sandwich ELISA) 很多做实验的小伙伴可能分不清楚ELISA和蛋白质印迹法(Western Blot, 简称WB)的区别。其实主要区别在于ELISA检测的是天然蛋白质,需要保持完整的三级结构。这让它在探究蛋白质相互作用时起了至关重用的作用。而通常WB都是检测失活的蛋白,使用的抗体可以辨别失活抗原一级结构中的抗原决定基(epitope)。与此同时,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)是WB的第一个步骤,它可以根据蛋白质的分子量将大小不同的蛋白分开。这一步ELISA是不包含的,虽然省时,但敏感度会下降。另外,ELISA通常是在96/384孔板上进行操作,相对于WB显示单一结果的特点,可以大大提高实验的生产量。正是因为很大的生产量,它在自动化实验和检测有着很大的潜力。 图片来自网络,内容由BioEngX原创,转载请注明! |
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