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原标题:FAQ | OLINK超微量精准蛋白质组学研究(上) 问:Sample Control 是由什么组成的,它是如何用于数据分析的? 答:样品对照是在每个板上重复运行的混合血浆样品。这些用作外部对照,以估计每个测定的内部和内部精度。 问:Negative Control 是由什么组成的,在 Olink Explore 的数据分析中是如何使用的? 答:Olink Explore 的阴性对照也包含在每块板上一式三份,由缓冲液作为正常样品运行。这些用于监测当 DNA 标签靠近而没有事先与适当的蛋白质结合时产生的任何背景噪音。阴性对照为每个蛋白质测定设置背景水平,并用于计算检测限 (LOD)。 问:Plate Control 是由什么组成的,它是如何用于数据分析的? 答:每个平板上的平板对照一式三份,由来自健康献血者的混合血浆组成。这些用于数据标准化以补偿运行和板之间的潜在变化。 问:如何对数据进行质量控制? 答:数据的预处理和质量控制是使用 Olink® NPX Manager 软件进行的。 内置的质量控制 (QC) 使我们能够控制检测和样品的技术性能,确保我们能够提供可靠、高质量的数据。QC 的基础取决于四个内部对照,这些内部对照在每次 Olink 分析中都加标到所有样品和外部对照中。 ✴ 运行评估 计算孵育控制 1、孵育控制 2 和检测控制的标准偏差并应低于预定阈值:0.2 NPX,对于整个 96 孔样品板。 ✴ 样品评估 分别计算孵育对照 2 和检测对照的样品板中值。对于每个样品,每个内部对照的结果与平板中值的偏差不得超过 ±0.3NPX。如果任何或两个内部控制超过 0.3NPX 限制,样品将无法通过 QC。如果超过 1/6 的样品未通过 QC,则该运行被视为不可靠。然后将评估问题的原因并(如果适用)重新运行样品。 展开全文NPX Manager 软件以两种不同的视图显示样品评估;板视图,显示每个样品的 NPX 值,以及 QC 视图,显示与 NPX 单位的板中值偏差。在下面的示例中,除 B2 孔中的“样品 11”之外的所有样品都通过了 QC。对于该样品,孵育对照 2 和检测对照分别偏离平板中值约 0.7 NPX 和 1 NPX,因此样品将无法通过 QC。此样本的 NPX 值将包含在数据导出文件中,但以红色字体表示。 在 96 孔板中的所有样品的所有 4 个内部对照的 NPX 值。计算 NPX 时使用扩展控制,因此在此视图中应为 0。 样品沿 X 轴列出,与板中值的偏差(以 NPX 为单位)显示在 Y 轴上。对于每个样品,都显示了一个红色和一个蓝色的点,它们分别说明了孵化控制 2 和检测控制与该样品的板中值的偏差程度。红色虚线显示了与板块中位数的 +0.3 NPX 和 -0.3 NPX 偏差的限制。未通过 QC 的样品名称以红色字体表示。 END
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