艾司唑仑的法医毒物动力学研究

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作者：

原九喜

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摘要：

目的 优化生物样品中艾司唑仑的高效液相色谱快速分析方法;建立艾司唑仑在大鼠体内毒物动力学,分布与死后再分布的动物模型;研究艾司唑仑在动物体内的毒物动力学,分布,死后再分布及艾司唑仑在保存样品中的稳定性,为艾司唑仑中毒(死)案件的法医学鉴定提供实验依据. 方法 1.高效液相色谱法检测:血及组织样品添加内标物地西泮,碱化后经乙醚萃取,以甲醇-纯水(75:25)为流动相,高效液相色谱内标法定量检测艾司唑仑含量.2.SD大鼠48只(实验组40只和对照组8只),随机分组,LD_(50)剂量(2.85mg/g)艾司唑仑灌胃,分别于给药后0.5h,1h,2h,5h,12h,24h,48h和72h处死各组大鼠,提取心血,心,肝,脾,肺,肾,脑,胃等组织,高效液相色谱内标法定量检测其中艾司唑仑含量.研究艾司唑仑在大鼠体内的毒物动力学及动态分布.3.大鼠12只(实验组10只和对照组2只),实验组大鼠分别以LD_(50)艾司唑仑2.85mg/g和2倍LD_(50)艾司唑仑5.70mg/g灌胃染毒,1h后处死,迅速解剖动物,取心血,心,肝,脾,肺,肾,脑,胃壁等组织.高效液相色谱内标法定量检测其中艾司唑仑含量,研究灌胃不同剂量艾司唑仑在大鼠体内的分布.4.大鼠40只(实验组35只和对照组5只),实验组大鼠以0.108mg/g艾司唑仑(人体最大用药量的100倍按大鼠/人体型系数推算)灌胃染毒,3h时处死,实验大鼠尸体仰卧置于20℃保存,不同时间(0h,2h,4h,8h,12h,24h和48h)各随机取5只,分别取心血,心,肝,脾,肺,肾,脑,肌肉.高效液相色谱内标法定量检测其中艾司唑仑含量.研究艾司唑仑在大鼠体内的死后再分布.5.犬6只(实验组5只和对照组1只),实验组犬以37.6mg/kg艾司唑仑灌胃染毒3h后处死,解剖取心血和肝.每只犬心血分四等份及肝分三等份,其中三份分别置于20℃,4℃,-20℃保存,另一份心血中加氟化钠至1%,20℃保存;分别于0h,1d,10d,30d,90d,150d和210d高效液相色谱内标法定量检测其中艾司唑仑含量.研究保存样品中艾司唑仑的稳定性.6.犬2只(实验组1只和对照组1只),实验组犬以37.6mg/kg艾司唑仑灌胃染毒3h后处死,解剖取其心脏,肝脏,肾脏,脑组织,迅速将以上组织各分为55份(1g/份),置于约4%甲醛溶液中,常温条件下保存.分别于样品固定前(0d)及固定1d,7d,14d,21d,28d,35d,42d,49d,56d和63d提取,分析组织及甲醛溶液中艾司唑仑的含量.研究艾司唑仑在甲醛溶液中的稳定性. 结果 1.毒物动力学LD_(50)(2.85mg/g)剂量艾司唑仑在大鼠体内的毒物动力学过程呈一级动力学特征,符合二室开放模型.心血中艾司唑仑达峰时间(t_(max)):5.570h;消除速率常数(K_(10)):0.046h~(-1);消除半衰期(t1/2k10):30.250h;表观分布容积(V):450.974L/kg;血药浓度-时间曲线下面积(AUC):3347.159;峰浓度(C_(max)):45.286μg/mL. 2.分布1倍LD_(50)剂量染毒大鼠3h后,胃,肾,心中艾司唑仑的含量较其它组织的含量高.1倍LD_(50)剂量染毒大鼠1h时体内艾司唑仑含量为:胃(58.212±4.649μg/g)﹥脾(24.211±2.310μg/g)﹥肝(23.284±3.217μg/g)﹥心(18.453±6.240μg/g)﹥肺(17.833±1.942μg/g)﹥脑(15.442±6.994μg/g)﹥肾(14.975±3.378μg/g)﹥心血(11.061±2.012μg/g);2倍LD_(50)剂量染毒大鼠1h时体内艾司唑仑含量为:胃(288.230±54.067μg/g)﹥心血(109.258±19.445μg/g)﹥肝(67.990±30.607μg/g)﹥心(59.877±33.427μg/g)﹥脾(37.528±30.270μg/g)﹥肺(35.332±17.134μg/g)﹥脑(33.534±20.257μg/g)﹥肾(25.509±8.162μg/g). 3.死后再分布染毒大鼠尸体20℃保存时,死后12h心血,肝,肾中艾司唑仑含量与0h含量有显著差异(P﹤0.05),呈升高趋势,之后下降;脾中艾司唑仑8h含量与0h含量有显著差异(P﹤0.05),呈升高趋势;心,肌肉中艾司唑仑8h含量与0h含量相比降低(P﹤0.05);肺中艾司唑仑4h含量与0h含量相比降低(P﹤0.05);脑中艾司唑仑2h含量与0h含量相比降低(P﹤0.05). 4.保存样品中艾司唑仑稳定性艾司唑仑染毒犬血在20℃,4℃和-20℃保存至210d时样品中艾司唑仑的含量与初始含量相比无统计学差异(P﹥0.05);染毒犬肝脏在4℃和-20℃保存至210d时的含量与初始含量相比无统计学差异(P﹥0.05);在4%甲醛固定(20℃)的犬组织中的药物含量从第1天起即呈显著下降趋势(P﹤0.05). 结论 1.建立了艾司唑仑的毒物动力学,分布,死后再分布研究动物模型,可应用于艾司唑仑的法医毒物动力学研究. 2.艾司唑仑在大鼠体内的毒物动力学过程呈一级动力学特征,符合二室开放模型,艾司唑仑在大鼠体内消除较慢. 3.染毒后不同时相大鼠体内艾司唑仑的动态分布以及不同染毒剂量组的大鼠体内艾司唑仑分布趋势均不同. 4.艾司唑仑在大鼠体内存在死后再分布现象,死后尸体在室温下存放时,心血,肝,肾,脾中艾司唑仑含量呈先升高后降低趋势,而心,肺,脑,肌肉中含量呈显著下降趋势.提示艾司唑仑中毒(死)案件法医学鉴定中应考虑死后再分布对心血中艾司唑仑浓度的影响,取检材应在死后8h内完成. 5.艾司唑仑在犬血中稳定,不同保存温度对其稳定性无影响;艾司唑仑在低温保存的犬肝中稳定;艾司唑仑在甲醛溶液中降解快.因此,艾司唑仑中毒案件的法医学鉴定的组织检材不可用甲醛固定,应采用其它方式保存.

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关键词：

艾司唑仑；毒物动力学；分布；死后再分布；稳定性

学位级别：

硕士

DOI：

10.7666/d.D156695

被引量：

5