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液相色谱峰分叉了，怎么办？ – 色谱学堂
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做液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰 很多时候 这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题 今天我们就一起看看导致峰分叉的原因 以及如何解决这个问题 首先，我们需要判断 这到底是一个峰，还是两个峰?
A图主峰前面有一个肩峰 这到底是峰形不好 还是另外一个化合物没分开呢? •− 判断方法 −• ∴ 降低该成分在样品中的浓度 B图是降低该成分浓度后 进样后得到的色谱图
如果这是一个峰 那肩峰也应该响应变小 但是这个例子里 肩峰没有变小 这应该是另外一个化合物 这时候，我们就要考虑如何改变方法 将这两个东西分开
如果所有峰的峰形都不好 一般来说 一个样品都会出多个峰 峰形不好，绝大多数时候 在每个峰上面都会出现 比如像下面这样:
A图是所有峰都拖尾. B图是所有峰都有肩峰， 也可以说峰分叉 这种情况一般都是色谱柱头塌陷 或者柱头的筛板被堵导致的 •− 为什么会导致峰形问题呢？ −• ∴ 请看下面的图
A图是正常的柱头 B图是筛板被堵的柱头 正常情况下 所有样品分子都是均匀通过色谱柱 形成一个对称的峰形 堵塞的情况下 有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰 导致时间拖后，形成拖尾 对于色谱柱塌陷的情况 用同样的方法大家也不难理解 只不过这时候 是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些 ……………………………………………………………………………………………………………………… •− 如何解决这个问题呢？ −•∴ −• 01 •− 反冲 柱出口放空， 冲20-30ml流动相。 虽然柱子上都有表明使用方向， 但是对于硅胶基质的色谱柱 基本都可以反冲。 将柱头污染物 如泵密封圈的碎屑， 样品中的污染等冲走， 就能解决问题。 当然，还是要提倡大家注意 样品上机之前的前处理 和及时更换磨损的泵密封圈。 有条件的还是用保护柱， 大不了就换保护柱， 也比换色谱柱强。
−• 02 •− 更换或清洗筛板 现在估计做这个事情的人不多， 但是谁有废柱子， 想练练也未尝不可。 ……………………………………………………………………………………………………………………… 我们一起看看一个实际的例子：
根据之前说的， 可能是柱头堵了， 或者塌陷了。 但是进一步检查， 发现另有原因。 方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子， 78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法， 进样10ul，100%乙腈溶解的样品。 一般来说， 虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好， 但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时， 的确会引起峰形的问题。 我们怎么办呢？ ⊂ 01 ⊃ 从最容易的办法做起， 降低溶剂乙腈的比例， 降到50%看看。 从下图B，4min的峰可以看出， 没啥改观。
⊂ 02 ⊃ 接下来反冲柱子， 结果如图C， 基本没变化。 算了，明天再说吧。
⊂ 03 ⊃ 第二天来到实验室， 还能干嘛呢? 更换筛板? 算了，直接换柱子吧！ 结果如D，
噢，好很多噢。 之前柱子肯定有问题，扔了。 但是峰还是有点宽， 估计还是哪儿有问题。 手上忙，没时间管这个。 ⊂ 04 ⊃ 几天过后， 重新配了流动相， 一跑，好了，如图E。
虽然到底什么原因导致之前峰形的问题， 已经无从查找 （柱子扔了，旧流动相也没了）， 但是也给我们提供了一个解决问题的步骤： ⇐ 1 ⇒ 确定峰形问题 是所有峰都有问题， 还是就是某一个峰有问题。 如果所有峰都有问题， 基本都是色谱柱， 或者仪器管路连接的问题。 如果是某一个峰有问题， 那就要从方法上来考虑， 是否需要改变流动相比例， pH值，色谱柱温度等等。
⇐ 2 ⇒ 从最简单的做起 从不需要换什么东西的方法做起。 比如改变样品溶剂， 反冲色谱柱等等。
⇐ 3 ⇒ 换东西 换保护柱，换色谱柱， 换流动相(新配)， 一步一步的换， 有助于找到问题的根本。
⇐ 4 ⇒ 总结经验 问题解决后， 想想需不需要采取什么措施， 防止类似问题的发生， 比如说常换流动相啦， 即时更换密封圈啦， 记录进样次数 了解什么时候色谱柱就不行了啊之类的。 ……………………………………………………………………………………………………………………… 希望以上信息能够让各位同学 在碰到峰形不好的问题时， 有一些思路， 不至于手足无措。 也欢迎大家在讨论群里讨论和补充 上面没有提到的可能影响峰形的可能。 祝大家在群里聊的愉快！
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