长岛地区深水网箱养殖许氏平鲉主要疾病的流行病学调查与病原病理学研究

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作者：

王凯

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摘要：

山东省长岛县大钦岛周边海域是我国北方大型深水网箱养殖的主要集中地,养殖的主要品种就是许氏平鲉(Sebastes schlegeli)。经过多年的不断发展,该海区深水网箱养殖规模不断扩大,疾病的发生也越来越频繁,成为影响养殖成活率的关键因素。特别是近几年来,该海区养殖的许氏平鲉疾病呈现了传染速度快、死亡率高等突出特点,已经严重影响了正常的养殖生产。本研究以长岛地区网箱养殖许氏平鲉为研究对象,从流行病学、病原学、病理学及感染微生态学等角度进行相关研究。具体研究结果如下:1.流行病学调查2016年~2017年,本研究围绕长岛地区深水网箱养殖的许氏平鲉进行主要疾病的流行病学调查,并以大钦岛网箱养殖区为固定调查点,对养殖区的主要海水水质指标,包括温度、盐度、p H、溶氧和细菌弧菌含量进行检测,同时对饵料、网衣附着物中细菌弧菌含量进行同步分析。流行病学调查结果显示,长岛地区许氏平鲉的大规模死亡主要集中在在6月份到11月份间,主要疾病为淋巴囊肿病、皮肤溃疡病和鼓眼病。淋巴囊肿属病毒性疾病,且随水温升高病鱼囊肿症状会逐步减轻,不会对本地许氏平鲉造成大量死亡,而皮肤溃疡症成为患病许氏平鲉的主要症状。大钦岛周围海域水质基本理化指标如温度、盐度、溶氧及p H较为稳定,符合海水二类水质标准,适合用于水产养殖。但水体、网衣附着物及发病期饵料中可培养细菌、弧菌含量在夏季高温期均达到较高水平,其中,水体细菌、弧菌含量对数值最高分别为6.75和5.60,网衣附着物上细菌、弧菌含量对数值最高可达5.94和4.79,饵料细菌、弧菌含量最高值可达6.66和5.57。2.许氏平鲉主要疾病的病原学及药物防控研究对患皮肤溃疡病的许氏平鲉进行病原菌分离,并通过形态学观察、常规生理生化试验和gyr B及16S r RNA基因测序等方法对分离菌株进行鉴定。实验结果证明,该地区的皮肤溃疡症主要是由两种不同的细菌引起的-美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.damselae)和轮虫弧菌(Vibrio rotiferianus),且两株菌导致的病症全然不同。美人鱼发光杆菌感染的许氏平鲉鳍基部出血发红,吻部略有溃烂,皮肤表面及尾柄溃疡面呈灰白色或灰黑色。轮虫弧菌感染的许氏平鲉身体表面出现明显的创伤性溃疡。对两株病原菌进行药物防控试验,药敏试验结果表明,美人鱼发光杆菌对菌必治、新霉素、氟苯尼考和萘啶酸等10种药物高度敏感,对头孢拉定、头孢唑啉等6种药物中度敏感,而对青霉素、吡哌酸等在内的13种药物耐药;轮虫弧菌对四环素类、喹诺酮类、香豆素类、肽酰转移酶类高度敏感,而对大环内酯类、多肽类、磺胺类、β-内酰胺类、氨基糖苷类中度敏感或不敏感。以黄连素为备选治疗药物,通过二倍稀释法测定其对美人鱼发光杆菌和轮虫弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果证明黄连素对两株菌的MIC均为128mg/L,对美人鱼发光杆菌的MBC为512 mg/L,对轮虫弧菌的MBC为256mg/L。黄连素稳定性试验证实,浓度为512 mg/L的黄连素溶液分别在20℃、40℃、60℃、80℃、100℃和121℃处理下作用30 min,对美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的杀菌率均在99%以上,将20℃、60℃、100℃处理的黄连素溶液于室温下避光存储35 d,对指示菌的杀菌率也仍大于99%,显示其良好的药物稳定性。金属离子的影响实验也证实,水环境中的Na+、Mg2+、Ca2+、K+等离子对黄连素的杀菌效果无明显影响。3.许氏平鲉主要疾病的病理学研究组织病理学和超微病理学研究发现,受美人鱼发光杆菌和轮虫弧菌侵染的许氏平鲉肠道、肝脏、肾脏和鳃等组织均发生了不同程度的变化。美人鱼发光杆菌感染鱼体后,肠绒毛上皮细胞溃烂,基膜层坏死相融,肌肉层结构松散;肝脏内血细胞浸润,肝血窦扩张,细胞空泡化严重;肾小球萎缩消失,肾小管结构破碎不完整;感染细胞空泡样变性,出现大量肉芽肿病灶,上皮细胞肿胀、变性及脱落。与之相比,轮虫弧菌感染后症状相似,但程度较轻。4.许氏平鲉肠道菌群与环境菌群的相关性分析采用Illumina Hiseq 2500平台高通量测序技术对许氏平鲉肠道菌群、水样、饵料及网衣附着物样品进行菌群相关性分析。结果显示,肠道样品和饵料样品中细菌以变形菌门和厚壁菌门为主,两者相对丰度之和可达95%以上;水样和网衣附着物样品菌群以变形菌门为主,拟杆菌门和厚壁菌门次之,浮霉菌门、放线菌门、疣微菌门、蓝藻菌门相对丰度较肠道样品和饵料样品也有不同程度的升高。在属水平上,柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、不动杆菌属(Acinetobacter)和假单胞菌属(Pseudomonas)在所有样品中均占有较高优势度。此外,肠道样品和饵料样品中的发光杆菌属在2016年7月份和11月份样品相对丰度升高,弧菌属在2016年8月、9月及2017年8月份样品中所占比例显著上升。这可能与7月份到11月份本地区许氏平鲉疾病爆发有较大关系。同时,PCo A图表明,肠道样品与饵料样品菌群相关性较大,而与水样和网衣附着物菌群相关性较小。

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关键词：

许氏平鲉 流行病特征 美人鱼发光杆菌 轮虫弧菌 组织病理 菌群结构分析