漂亮的茜素红染色是这样完成的

茜素红的染色原理是啥？如何得到漂亮的染色结果？知识点都整好了 ！

茜素红（Alizarin Red S）是一种常用的染色方法，实质是一种蒽醌衍生物，常用来体外检测组织切片或者培养细胞的钙质变化。机体内的钙，一方面构成骨骼和牙齿，另一方面则可参与各种生理功能和代谢过程，影响各个器官组织的活动。茜素红的作用机制在于它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。

干细胞具有自我更新、多向分化的潜能，可以向成骨、成脂、成软骨分化。在特定的诱导培养基作用一段时间后，干细胞可分化为成骨细胞，在细胞表面沉积钙盐，形成钙结节。茜素红可以对少量的钙沉积物进行染色，可用于鉴定干细胞是否已成功向成骨细胞分化。

干细胞成骨诱导茜素红染色步骤

1.  成骨诱导分化结束后，吸去六孔板中的成骨诱导分化完全培养基，用1×PBS轻柔洗涤2~3次。

2.  每孔加入2mL 4%多聚甲醛溶液（或10%福尔马林），室温固定30min。

3.  吸去固定液，用1×PBS轻柔洗涤2~3次，确保将固定液清洗彻底。

4.  每孔加入2mL茜素红工作液，室温染色5~10min。

5.  吸去茜素红染色液，用1×PBS轻柔洗涤2~3次，充分洗去多余染色液。

6.  每孔加入2mL 1×PBS，将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果。   

7.  染色后的六孔板用封口膜封装后，置于4℃可保存2周。

注意要点

‼ 为防止钙结节脱落，所有操作尽可能轻缓。

‼ 茜素红使用前请恢复至室温。

‼ 不能以诱导时间决定染色时间，而务必以镜下可见聚集的钙结节为准。

‼ 时间控制在5min左右，如果染色效果较浅可以适当延长时间。

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赛业OriCell®茜素红染色液可以对少量的钙沉积物进行染色，适用于干细胞的成骨诱导分化中钙盐组织的染色。推荐使用赛业OriCell®干细胞成骨诱导分化试剂盒套装进行成骨诱导实验，能够有效提高成骨诱导效率。

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