DNA提取实验报告（八篇）

生物学大实验（二）

实验名称：质粒扩增、提取和鉴定实验

实验目的 通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作，加深对分子生物学基本技术的理解和掌握。

实验仪器设备：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。

实验原理：质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中，通过对细菌、放线菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。经过处理的线状DNA在外界环境恢复正常的时候不能够复性 而质粒DNA可以复性，从而可以实现质粒DNA和染色体DNA的分离。限制性内切酶能特意地结合于一端被称为限制性酶识别系列的DNA系列之内或其附近的特异位点上，并切割DNA。当对提取的质粒DNA进行电泳时，同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。

实验步骤：

一 质粒扩增

（1）普通LB固体培养基制备：     制备LB培养基，倒入灭菌瓶中高压灭菌，待完全冷却后，保存备用。

（2）将大肠杆菌接种于LB培养基中，37℃振荡培养过夜(200转/分)

二 质粒DNA的提取(碱法)

1将菌液倒入1.5ml的微量离心管中， 12000rpm离心一分30秒，弃去上清液，以得到较多的细菌沉淀； 2、 将微量离心管开口倒置在卫生纸上，使离心管底部的液体流尽。 3、 加入100μl用冰预冷的溶液I，剧烈振荡，将沉淀彻底悬浮，然后室温放置5分钟。 4、 加入200μl现配的溶液II，盖紧管口，轻轻快速颠倒离心管（不要振荡，以避免DNA断裂），使混合物混匀，冰浴5～10分钟。 5、 加入150μl预冷的溶液III，盖紧管口，温和颠倒混匀，使粘稠地细菌裂解物均匀地分布于溶液III中，冰浴5分钟。 6、 取上部水相，移入新的离心管，加入2倍体积预冷的无水乙醇（也可同时加入1/10倍体积的醋酸钠），震荡混匀，室温放置10分钟沉淀双链DNA，然后4℃，12000rpm离心10min。 7、 弃去上清液，将离心管倒置于卫生纸上，使离心管底部的液体流尽后，加 入预冷的1ml 70％乙醇。 8、弃去上清液，将离心管倒置于卫生纸上，使液体流尽，置DNA干燥5～10分钟。

…… …… 余下全文