蛋白纯化方法

离子交换层析法是根据电荷特性分离生物分子的一种蛋白纯化方法,由于该法操作简易，分辨率高且通量大，迅速成为蛋白质、多肽、核酸及大部分发酵产物分离纯化的一种重要方法。本文介绍了离子交换层析的原理，介质以及常见问题解析。

1.离子交换层析的基本原理：

  离子交换层析法是蛋白纯化的一种方式，通过带电的溶质分子与离子交换层析介质中可交换离子进行交换，从而达到分离纯化的目的。

  离子交换层析法主要依据电荷间的相互作用，利用带电分子中电荷的微小差异而进行分离，具有较高的分离容量。几乎所有的生物大分子都是极性的，都可使其带电，所以离子交换层析法的应用很广泛。

2.离子交换层析的介质：

  有许多离子交换介质都已经商品化，但不存在一种神奇的介质其最适合各种蛋白质的纯化。选择离子交换介质的标准包括应用的特异性需要、样品成分的等电点和分子大小（即目的蛋白和污染物），以及可得到的装备（如泵和柱子）。

  首先需要选择阴离子或阳离子介质，如果目的蛋白的等电点已知，选择阴离子介质且操作的pH高于目的蛋白的pI，或选择阳离子介质且操作pH低于目的蛋白的pI。如果靶蛋白的pI未知，开始之前最好先测定它。最佳操作pH可根据经验确定。因为大多数蛋白质的pI低于7，选择阴离子交换和操作pH为8.5开始是合理的，然后根据估计结果和优化条件。知道蛋白质溶液中污染物pI和结合特征也是有用的。

3.离子交换层析的缓冲系统：

  必须根据需要的pH范围选择缓冲系统，必须考虑的因素包括所用的离子交换类型、样品的pH稳定性和使用的pH范围，以及需要的缓冲能力，最后是成本。下表列出了各种有用的缓冲液。缓冲液中的添加成分（如变性剂和蛋白酶抑制剂）也应和离子交换介质带有相同的电荷，以组织结合。

4.离子交换层析常见问题解析：

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