内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法)(C0276S)

碧云天生产的内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法)，即Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit，是一种基于鲎试剂酶促反应原理，通过比色法定量检测细菌内毒素(endotoxin)也称脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)的超高灵敏度、高稳定性、强抗干扰能力的常用试剂盒。检测灵敏度可以低达0.01EU/ml，并且可以检测微量样品，样品的体积可以仅为10微升或更小体积。

本试剂盒首次启用后，适当保存至少在2个月内有效。基于鲎试剂的内毒素检测试剂盒，通常只能配制后立即使用，导致试剂盒的浪费。本试剂盒经过精心优化，确保首次配制成溶液后，按照说明书推荐的方法保存，至少2个月内有效。

本试剂盒检测时间短，样品需求量小。检测试剂加入到待测样品中最快16分钟左右，即可完成显色反应，从而实现简单、快速、高灵敏地检测内毒素含量；不依赖凝固蛋白形成凝胶，抗干扰能力强，可适用于本底颜色为淡黄色的样本，如血浆、血清等；对待测样品消耗量小，每个反应体系仅需使用10μl待测样品；含有偶氮化试剂，检测灵敏度高、测定样品的线性范围宽，并且可避免有色检品自身颜色对检测的干扰[1]。

用途：溶液样品中内毒素污染检测；各种不同类型样品中内毒素含量的定量检测。

原理：鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞裂解物的冷冻干燥品(Lyophilized Amebocyte Lysate, LAL)或体外重组的同类试剂，鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度，pH值及无干扰物质)，内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解本试剂盒中提供的显色剂，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺(pNA，λmax =405nm)。在一定时间内，pNA的生成量与内毒素浓度成正相关。同时，对硝基苯胺(pNA)也可与偶氮化试剂反应生成玫瑰红色产物(λmax =545nm)，据此可以定量待测样品的内毒素浓度，并可避免待测样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰[2,3]。

检测灵敏度高。最低检测限可以达到0.01EU，可以自行选择的有效检测区间为0.1E -1.0EU/ml或0.01 -0.10EU/ml。具体的检测效果请参考图1。

图1.碧云天生产的内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法) (C0276)检测标准曲线的效果图。取配制好的下列浓度的内毒素标准品溶液：0.000、0.010、0.025、0.050、0.075、0.100EU/ml (A)及0.00、0.10、0.25、0.50、0.75、1.00EU/ml (B)各10μl，用本试剂盒进行显色反应及标准曲线的检测。实际检测时会因检测仪器等实验条件的的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

一个包装的本试剂盒共可以检测160个样品(含标准品)。

4ºC保存，两年有效。内毒素检测试剂溶解后须立即适当分装，-20ºC保存一周有效，经液氮速冻后-80ºC保存至少两个月有效。其余试剂溶解后-20ºC保存，至少6个月有效。

内毒素检测试剂溶解后很不稳定，需要尽量在10分钟内使用完毕或适当分装后保存。因此试剂盒在使用过程中需要预先做好各项准备工作，在需要加入内毒素检测试剂前再溶解内毒素检测试剂，或解冻之前分装冻存的内毒素检测试剂。

本产品所提供的内毒素检测用水请在首次开启后建议立即使用完毕，或务必在无内毒素实验条件下，使用无内毒素实验耗材对其适当分装并保存于-20℃。常规实验室条件下，反复多次取用同一容器中的内毒素检测用水，极易因环境因素造成内毒素的污染。

请务必使用首次开启的内毒素检测用水或分装后确保无内毒素污染的内毒素检测用水，或自行准备的确保无内毒素的超纯水进行内毒素检测所需试剂的溶解和配制，以免造成试剂的内毒素污染。

所有内毒素检测的实验过程均需在无内毒素条件下，使用无内毒素实验耗材进行，否则极易对内毒素检测造成干扰。

实验所用的器皿需经预处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在250ºC干烤至少60分钟，也可以采用其它确保不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械，应选用表明无内毒素并且对实验无干扰的器械。

实验操作过程应防止微生物的污染。

溶解并稀释后的内毒素标准品溶液静置时间若超过10分钟，使用前应在旋涡振荡器上振荡混匀1分钟。冻存的溶解后的内毒素标准品，下次使用时须先充分溶解，并剧烈涡旋混合后使用。

本试剂盒中的内毒素检测试剂溶解后，须立即适当分装，-20ºC保存一周有效，经液氮速冻后-80ºC保存至少两个月有效。务必避免反复冻融。

内毒素检测所需试剂在溶解配制好后，如不能一次性使用完，请立即使用无内毒素的耗材进行分装冻存，随用随取。

同一管检测试剂在常规实验条件下多次反复取用后，也极易造成环境中内毒素的污染，建议根据实验需求对试剂进行适当分装。

推荐设置不添加待测样品的空白对照，以确认整个检测体系是否被环境内毒素所污染。

样品的稀释和制备，推荐使用碧云天的无内毒素超纯水ST878 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile, Endotoxin-Free)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。