细菌形态学观察技术

将细菌培养物或含菌标本材料制备的染色标本片，置显微镜油镜头下，可以观察到细菌的形状、大小、结构、排列及染色特性等，了解这些特征有助于鉴别各种细菌。 一、显微镜油镜头的使用与保护 【使用原理】 用油镜观察标本、是在使用高倍镜的基础上，采用同玻璃折光率相似的油状物（如香柏油、液体石腊等），滴加在标本与油镜头中间，以避免光线散射，提高显微镜的清晰度和分辨能力。使观察物象更加清楚明了。 【操作方法】 1. 调试：打开电源，先采用低倍镜，使视野达到清晰光亮。 2. 加油：双手向上转动粗螺旋，使镜筒上升，将标本片固定于载物台上，使染色面对准集光器央，加镜油于标本面，调换油镜头对准标本面。 3. 调焦点：用左手向下轻转粗螺旋，使镜筒下降，同时眼睛从右侧观察下降程度，待镜头入油后接触上玻片，用眼观目镜，反转粗螺旋，使镜筒慢慢上升，待看到模糊物象时，改用细螺旋上下调节，使物像达到完全清晰为宜（一般转动细调节前后半圈）。 4. 观察：观察时只使用细调。需改换视野时，右手操纵推进器，左手转动细螺旋，做到配合自如。并养成左眼观察，右眼绘图的习惯。 【油镜头的保护】 油镜头使用完结后，必须用擦镜纸滴加少量二甲苯将油擦洗干净（二甲苯用量宜少，以免镜片间粘胶溶解）。下降集光器，半接物镜转成“八”字，再下降镜筒，轻触镜台表面，双手平持显微放入镜箱，避免直射日光，置于干燥处，以防受潮。 【注意事项】 1. 使用直筒显微镜观察标本时，必须两眼同时睁开，训练使用左眼观察，右眼绘图。如用油镜头观察，勿将镜身歪斜，避免镜油流出片面。 2. 观察染色标本时，光线宜强，可上升集光器，开大光圈。观察不染色标本时，光源宜弱，可下降集光器，缩小光圈。 3. 使用完毕，一定擦去镜油。 二、细菌不染色标本 不染色的细菌和标本镜检，虽可观察细菌在自然生活状态下的大小、形态、活动等，但主要用于观察细菌的动力。 （一）悬滴法 【材料】 1. 细菌：枯草杆菌8~12小时肉汤培养物。 2. 凹玻片，盖玻片，凡士林等。 【方法】 1. 取凹玻片一张，于凹窝周围涂少许凡士林（见图1）。

2. 用接种环沾取枯草杆菌8~12小时培养物，置于盖玻片中央。 3. 反转凹玻片，使凹窝对准盖玻片中央，盖于其上，轻压后，迅速翻转玻片，使盖破片面向上。 4. 标本片置于显微镜载物台上，先用弱光线，低倍镜找物象，再改换高倍镜观察，密切注意，勿压破盖玻片。 5. 观察：细菌在镜下为灰色半透明体，并呈现真运动，如在明亮的海洋中，深入浅出游来动去。 （二）压滴法 用途同悬滴法。 【材料】 1. 细菌：枯草杆菌8~12小时肉汤培养物。 2. 载物玻片：盖玻片等。 【方法】 1. 取无油污物玻片1张。 2. 用接种环沾取枯草杆菌8~12小时肉汤培养物置于载物玻片中央。 3. 加盖玻片于菌液表面，观察方法同悬滴法。 三、细菌染色标本片的制备（操作） 由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等，在细菌和鉴别上有重要意义。