蛋白电泳

蛋白 Marker 即蛋白质分子量标准，是几种已知的标准蛋白质混合物，用来指示蛋白质条带对应的分子量大小，常用于 SDS-PAGE 和 Western Blot 实验中。选择正确的蛋白 Marker 是实验成功的必要因素之一，蛋白 Marker 是蛋白大小的标尺，同时可以提示电泳程度、电泳是否正常、Western blot 转膜是否成功等。

SDS-PAGE 电泳检测蛋白时，蛋白 Marker 与靶蛋白同时在电场作用下移动，在变性剂 SDS 和还原剂的作用，蛋白三维结构被打开，蛋白和 SDS 形成的复合物所带电荷量差异不大，故其在凝胶系统中的迁移速度只与分子量大小相关，同等分子量大小的蛋白迁移速度基本相同，为此我们可以根据蛋白 Marker 条带的分子量作为参照，判断待测样品条带的分子量大小。

非预染蛋白Marker

几种已知大小的标准蛋白质预混液，不附带染料或标记分子，所示大小即蛋白质实际大小，是精确判断蛋白大小的产品。选择蛋白Marker时，尽量选择条带分布较均匀，至少有一个条带和靶蛋白大小相近的。Marker条带越多参考价值越大，也越难区分，通常将其中某些条带浓度加倍来提示其大小。

需要注意的是非预染蛋白Marker只能在电泳完成，和靶蛋白一起进行染色、脱色后才能显示条带，无法实时监测电泳或转膜效果，实验时很不方便。

非预染蛋白Marker显色推荐使用擎科金牌考马斯亮蓝染色液（TSP020）。

预染蛋白 Marker  

预混蛋白质通过与染料共价耦联，在电泳或转膜过程中可以直接观察到，达到实时监测的目的，无需染色、脱色，比非预染蛋白 Marker 使用更方便。观察到 Marker 电泳异常时及时终止电泳；预测靶蛋白进入最佳分辨区时，停止电泳以得到最佳分辨效果。

单色预染蛋白 Marker 也是利用某些条带加倍浓度来提示其大小。多色预染蛋白 Marker 则通过不同颜色区分使辨认条带更加轻松，还能给做实验的小伙伴带来彩虹般的愉悦心情。

预染蛋白 Marker 是做 Western Blot* 最常用到的蛋白 Marker，标示蛋白质分子量大小并实时监测蛋白质在 SDS-PAGE 中的电泳迁移效果及蛋白质的转膜效率，同时可以直接省去常规 Western Blot 试验中使用丽春红等染色检测转膜效果的步骤。

图1 Western Blot 原理（左）及流程图（右）

需要注意的是预染蛋白 Marker 通过与染料共价偶联来实现蛋白的可见性，染料本身的分子量和电荷会对大小标定造成一定影响，在不同的电泳缓冲条件下，蛋白条带的迁移会产生些许偏差，不太适合精准定位蛋白。但这不影响 Western Blot 试验时预染蛋白 Marker 分子量估算、确认凝胶迁移和估算转膜效率的作用，如果要需要区分大小相近的蛋白条带，或者需要精确蛋白分子量时可以与非预染蛋白 Marker 同时使用。

预染蛋白 Marker 在不同缓冲体系中有不同的表观分子量，需要使用非预染蛋白 Marker 进行分子量标定。如图 2，TreliefTM Prestained Protein Ladder（TSP021）分别在常用缓冲液 15% Trisglycine 和 20% TrisMops 中的表观分子量有差异，但这两种缓冲液中的表观分子量都经过了 Thermo26610 和 26614 非预染蛋白质分子量标准标定，保证分子量的准确性。

图2 Trelief TM  Prestained Protein Ladder（TSP021）分别在 15% Trisglycine 和 20% TrisMops 缓冲液中的分子量分布图

曝光蛋白 Marker

常规预染蛋白 Marker 不能在X光胶片上曝光显色，需要将膜上的预染蛋白 Marker 和曝光的蛋白条带手工拼接，来确认蛋白的位置和大小，容易造成偏差。

曝光蛋白 Marker 可以直接与靶蛋白一起在X光胶片上曝光显色。这类蛋白 Marker 一般是由含 IgG 结合位点的重组蛋白质组成，IgG 结合位点可结合用于检测靶蛋白的一抗或二抗，使得蛋白 Marker 可与目的条带一同曝光显色，结果直接呈现在同一张图片上，使 Western Blot 结果更加准确可信。不过曝光蛋白 Marker 价格昂贵，是常规蛋白 Marker 的几倍以上。

蛋白 Marker 使用注意事项  

收到蛋白 Marker 产品后，请先离心，将管壁或管盖上的蛋白 Marker 全部离心后再保存。

蛋白 Maker 建议保存于 -20℃，避免反复冻融，大包装产品建议分装保存。

使用前仔细阅读产品说明书，预染蛋白 Marker 使用前需注意选择适当缓冲体系，说明书中未涉及的电泳缓冲液，建议用非预染蛋白 Marker 先进行分子量标定。  

擎科生物提供高品质的彩色预染色蛋白分子量标准 TreliefTM Prestained Protein Ladder，条带清晰锐利，性能稳定可靠，适合作为 SDS-PAGE 和 Western Blot 的蛋白质分子量标准。回复小编或联系 [email protected] 即刻开聊【惊喜优惠等着您】。