革兰氏阴性菌与革兰氏阳性菌的区别 ​

革兰氏染色步骤准备样品：

1.在干净的玻璃显微镜载玻片上贴上样品标识。确保使用铅笔，因为染色过程中使用的试剂可能会洗掉墨水。

2.如果是从液态细菌培养物中制备载玻片，请执行以下操作：

使用无菌环将一滴小滴培养物轻拍到载玻片上。将小滴以圆周运动的方式轻轻涂抹到直径约1厘米的区域中。对于非常密集的培养物，可能需要预先稀释培养物，以确保染色后在显微镜下可以看到单个细菌细胞。

如果源材料来自细菌板：

将菌落材料环重悬在无菌磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，然后进行液体培养。

3 .涂抹物风干后，将涂抹过的载玻片通过火焰两次或三次。这会杀死 涂片中的微生物并将样品固定在载玻片上，但请注意不要使样品过热， 因为这会改变细胞形态。

样品染色：

1.轻轻地用紫罗兰色的紫色涂抹，然后静置1分钟。稍微倾斜片子，然后用自来水或蒸馏水轻轻冲洗 。结晶紫是一种水溶性染料，可进入细菌细胞壁中的肽聚糖层。

2.用克氏碘轻轻涂抹涂片，然后静置1分钟。稍微倾斜幻灯片，然后用自来水或蒸馏水轻轻冲洗。现在，涂片将显示为紫色。加入革兰氏碘溶液（碘和碘化钾）与紫罗兰形成复合物，紫罗兰色晶体变得更大，而且不溶于水。

3.使用95％乙醇或丙酮使涂片脱色。稍微倾斜滑片，然后逐滴滴加酒精，直到酒精几乎完全清除（5-10秒），立即用水冲洗以避免过度脱色。脱色剂使肽聚糖层脱水，使其收缩并变紧。在革兰氏阳性细菌中，大的结晶紫碘复合物无法穿透并逃脱厚的肽聚糖层，从而形成紫色染色的细胞。然而，在革兰氏阴性细菌中，外膜降解，肽聚糖薄层不能保留结晶的紫-碘配合物，并且颜色丢失。

4.用番红花复染剂轻轻冲洗，并放置45秒钟。稍微倾斜幻灯片，然后用自来水或蒸馏水轻轻冲洗。 番红花微溶于水，会使细菌细胞染成淡红色，从而使革兰氏阴性细胞可视化，而不会影响对革兰氏阳性细胞紫色的观察。

5.将载玻片吸干，放在滤纸上，然后在油浸下使用光学显微镜观察涂片。

革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌的区别

革兰氏阳性菌

当革兰氏染色后在光学显微镜下观察时，革兰氏阳性细菌具有独特的紫色外观。这是由于紫色结晶紫染色保留在细胞壁的厚肽聚糖层中。革兰氏阳性细菌的例子包括所有葡萄球菌，所有链球菌和某些李斯特菌。

革兰氏阴性菌

当在革兰氏染色后在光学显微镜下观察时，革兰氏阴性细菌呈现淡红色。这是因为它们的细胞壁的结构不能保留结晶紫染色，因此仅通过番红花复染染色。革兰氏阴性细菌的例子包括肠球菌，沙门氏菌和假单胞菌。

革兰氏染色不能可靠地用于评估细菌的系统发育关系。革兰氏阳性菌的单膜被认为是祖先状态。从历史上看，革兰氏阴性细菌上发现的第二个膜仅进化一次，因此所有革兰氏阴性物种之间的相互关系比与革兰氏阳性物种之间的关系更紧密。但是，遗传分析表明情况并非如此，它可能在不同的谱系中进化了多次，是趋同进化的产物。

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