指纹图谱相似度评价软件

摘 要：目的  比较栀子炒制前后化学成分差异，明确其差异标志物，为栀子与炒栀子质量标准的制定提供参考。方法  采用全-精细指纹图谱和多指标含量同时测定对栀子炒制前后样品进行分析，采用层次聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析对栀子与炒栀子指纹图谱进行比较，筛选出导致差异的特征性成分。结果  栀子炒制前后指纹图谱中共有15个峰，其中12个峰为两者所共有，栀子与炒栀子对照指纹图谱的全指纹图谱相似度为0.991，而去除栀子苷积分后建立的精细指纹图谱相似度为0.880，低于0.90，可基本实现两者区分；多元统计分析结果表明栀子与炒栀子可明显分为2类，并筛选得到贡献度较大的4个差异标志物，分别为峰3、5、9(栀子苷)、11(西红花苷I)；含量测定结果表明栀子炒制后栀子苷、西红花苷I、西红花苷II含量显著降低，而去乙酰车叶草酸甲酯含量显著升高。结论 栀子炒制前后成分差异显著，建立的精细指纹图谱结合多成分含量测定方法可有效区分栀子与炒栀子，筛选得到的差异标志物可为其质量标志物的选择提供参考。

栀子始载于《神农本草经》，为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实[1]，现收载于《中国药典》2015年版，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒功效[2]，炒栀子为栀子照清炒法炒至黄褐色所得炮制品，炒制后可缓解其寒性，减少对肠胃的刺激[3-5]。随着中药现代化、国际化进程的加快，中药质量标准不断完善，中药“饮片炮制前后的成分变化”“生熟异治中药饮片有别于中药材的专属性鉴别指标研究”等已列入《中国药典》2020年版重点开展的工作[6]。《中国药典》2015年版栀子项下针对栀子和炒栀子均只对栀子苷含量进行限定，仅靠栀子苷单一指标不能全面反映栀子与炒栀子饮片的质量，因此对栀子炒制前后化学成分差异进行系统研究，明确其差异标志物，对栀子及其炮制品质量标准的提升非常有必要。

指纹图谱可以较为全面地反映中药所含化学成分，已成为中药质量全面控制的一种重要手段；指纹图谱结合多元统计分析可用于不同产地、基原、炮制品的差异评价，筛选得到其差异标志物[7-15]。因此为明确栀子炒制前后化学成分变化及其差异标志物，本实验采用课题组前期建立的栀子指纹图谱和多指标成分含量测定方法[9]，对栀子与炒栀子全/精细指纹图谱及去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、西红花苷I和西红花苷II 5种指标成分含量进行分析，进而结合聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)多元统计分析方法对栀子及炒栀子化学成分差异进行全面评价，明确其差异标志物，为栀子和炒栀子质量标准的建立及质量标志物的选择提供参考。

1  仪器与材料

Agilent 1260高效液相色谱仪，四元泵，自动进样器，柱温箱，DAD检测器，Agilent Chemstation(C.01.03)色谱工作站，美国安捷伦科技有限公司；KH-500E型超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司；FA2104电子分析天平，上海良平仪器仪表公司&#