奥沙利铂对二甲肼诱导的结肠癌大鼠CD44V6、VEGF、survivin、Caspase

结肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，其侵袭力非常强[1]，在恶性肿瘤发病率中居第四，相关死亡率居第二位[2]。由于结肠癌的发病位置较低，深入盆腔，且与肛管括约肌接近，考虑到保留肛门及其功能，故结肠癌手术不易彻底切除。在临床治疗上，无法进行结肠癌手术治疗或结肠癌术后会有化疗配合治疗。

奥沙利铂是继顺铂和卡铂之后的第三代新型铂类抗癌药，具有广泛的抗肿瘤谱，在人结肠癌模型中，都表现出广谱的体外细胞毒性及体内抗肿瘤活性作用。应用于治疗转移性结肠癌，辅助治疗原发肿瘤完全切除后的Ⅲ期结肠癌[3]。而关于奥沙利铂抗肿瘤的作用机制，目前尚未完全清楚。本研究观察奥沙利铂对结肠癌大鼠的影响，为研究奥沙利铂治疗结肠癌的作用机制提供科学的基础数据。 1 材料与方法 1.1 实验动物

SD大鼠，SPF级，雌雄各半，体质量（200±20）kg，由广西医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证SCXK（桂）2009-0002，实验动物使用许可证SCXK（桂）2009-0005。 1.2 仪器与试剂

奥沙利铂、二甲肼购自美国Sigma公司；VEGF试剂盒购自美国R&D公司；CD44V6试剂盒购自奥地利Bender Medsystems公司；兔抗羊IgG-HRP、兔抗人Caspase-3、兔抗人Caspase-7多克隆抗体、兔抗人survivin多克隆抗体购自Neomarkers生物技术公司；兔抗羊IgG-HRP、酶免分析仪购自美国Thermo Forma公司；垂直电泳仪、转膜及显影设备购自Bio-Rad公司；DDL-5 高速冷冻离心机购自上海安亭科学仪器厂；Gel doc 2000低温高速离心机购自德国西门子公司。 1.3 实验方法 1.3.1 结肠癌大鼠模型建立[4]

42只SD大鼠均颈背部皮下注射二甲肼（30 mg/kg）。每周注射 1次，连续注射5周。随机抽取2只模型大鼠切取直肠用10%中性甲醛溶液固定24 h后，乙醇脱水，石蜡包埋，切割制备3 μm厚的组织薄片进行HE染色，病理学观察，检测结肠癌大鼠模型成型情况。 1.3.2 分组及给药

将成功建立结肠癌大鼠模型的40只SD大鼠随机分为4组，每组10只：模型组、奥沙利铂高剂量（27.2 mg/kg）、中剂量（13.6 mg/kg）、低剂量组（6.8 mg/kg）。结肠癌大鼠模型建立后，将奥沙利铂溶解于1 ml 5%的葡萄糖注射液，尾静脉注射给药，每3周给药一次，连续给药12周。另设正常组SD大鼠10只。正常组与模型组给予1 ml 5%的葡萄糖注射液代替。末次给药48 h后处死动物，取材。 1.4 指标检测

取相同地方相同长度的结肠组织，中性甲醛固定、脱水、包埋、切片，0.2%亚甲蓝染色。显微镜下观察记录结肠组织中异变腺窝病灶的数量。ELISA法检测结肠癌大鼠血清中CD44V6和VEGF的含量变化。Western blot法检测结肠癌组织中survivin、Caspase-3和Caspase-7的蛋白水平。 1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0软件。计量资料以(x±s)表示。组间比较采用t检验，经方差齐性检验，方差齐者采用t检验；方差不齐者采用矫正t检验进行统计处理。P