【原创】小鼠大脑皮层神经元原代培养（多图）

2024-06-16 10:34| 来源: 网络整理| 查看: 265

小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤1、于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑；2、预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块；3、移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min；4、将皮层组织碎块移入离心管，弃去剩余消化液，用接种液洗3次，每次洗涤后使组织块充分沉降到试管底，弃去上清液；5、最后再用接种液1ml混悬，反复吹打（巴氏吸管）混悬液中组织块，力度适中，至浑浊后将上清液移入培养瓶待用；6、加入1ml接种液后再次吹打，如此反复3-4次，组织块逐渐消化后，弃去最终残块；7、收集含单细胞悬液的上清液约4-5ml于培养瓶中，以接种液重新悬浮细胞，细胞记数；接种1x107个细胞于6孔培养板中；8、培养24h至细胞贴壁后，换全培养液（DMEM/F12+2%B27）培养3d，观察神经元生长状况；9、换用阿糖胞苷培养液(终浓度2.5ug/ml，换半液)培养3d以抑制神经胶质细胞及杂细胞生长，获得单纯培养的原代神经细胞；10、每隔3d换全培养液1次，每次换半液。

神经元免疫化学鉴定

1、4%多聚甲醛固定细胞30min，PBS洗涤3次；2、加入无水甲醇:30%双氧水（5:1）处理30min，PBS洗涤3次；3、加入5%羊血清封闭20min，弃去多余液体；4、加入Rabbit Anti-NSE（1:100）（神经元特异性烯醇化酶），培养箱中孵育2-4h，PBS洗涤3次；5、加入Cy3-羊抗兔IgG（1:50）和20µl抗荧光衰减封片剂，室温放置1h； 6、加入DAPI染液（1:40），室温放置5-10min；PBS洗涤3次。7、荧光显微镜观察； screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=640 height=480 title="Click to view full hm-neuron刚种植20x副本.jpg (640 X 480)" border=0 align=absmiddle>

上一张为刚接种时细胞图

培养一天后（缩略图，点击图片链接看原图）

培养2d后（缩略图，点击图片链接看原图）3d后 screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=640 height=480 title="Click to view full pz-neuron3d20x-2副本.jpg (640 X 480)" border=0 align=absmiddle>4d后（缩略图，点击图片链接看原图）5d后（缩略图，点击图片链接看原图）6d后（缩略图，点击图片链接看原图）第7d免疫鉴定图（缩略图，点击图片链接看原图）so amazeing!可以传代吗？为什么不加N2？不加血清吗？细胞外基质是什么？不加其他生长因子？LZ的小鼠是多少天的?LZ的小鼠是多少天的? 是胎鼠吗?fantastic !culture11043 wrote:第7d免疫鉴定图呵呵，你的鉴定结果似乎全染上了。做张阴性对照试试。好象形态学不是很有神经原的特点。也不是特别漂亮。那位有更典型的光镜和荧光的图片，大家分享一下。我也在养神经原，养得不是特别满意，我的培养基是DMEM/F12+10%FBS，第三天加5mg/L的阿糖包苷。四眼看科学：不可以传代，B27添加剂比N2好，无血清，本来打算用神经元基础培养基但是现在还没有到货只好先用DMEN/F12,没有加其它因子

DIGE，njauliurui：小鼠是新生3天的

wonderful!阿糖胞苷培养液4mg/ml？你的细胞还能活着吗？笔误吧？谢谢shanshanxu，是我没写清楚，阿糖胞苷终浓度2.5ug/ml欢迎大家加入这个qq群啊：30485167各位大侠，我想做神经元的蛋白质组学，多少密度接种合适呀?有没有做过的呀？我养的是大鼠胎鼠神经元，用的是Neurobascal/B27/Glutamin。

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