浅析多肽类药物生物分析的挑战与难点及其应对策略

（1）分子量小、半衰期短

检测多肽的关键试剂是抗体。而多肽的分子量小，结构不是很复杂，使得多肽表位数目有限，往往具有类半抗原的性质，抗体难以产生或效价极低，这都为生物分析关键性试剂抗体的制备带来很大的挑战。由于多肽的半衰期短，在机体中往往表现为快速消除，因此生物分析方法的灵敏度和检测下限有了更高的要求。

（2）给药方式与给药剂量

在众多的给药方式中，静脉给药是生物利用度最高的，而许多较长的多肽类药物在血液中的半衰期一般很短，静脉注射后很快就被清除或降解。非静脉给药的方式生物利用度低给生物分析提出了挑战。如许多激素类药物多为皮下给药，且药剂量偏低，因此需要检测方法更加灵敏，更低的检测下限。

（3）内源性对应物的干扰

在对有内源性对应物的多肽分子建立分析方法时，我们需要特异性非常高的抗体试剂才能够区分出内源性和外源性的分子，这就给抗体的制备带来了很大的挑战。同时，由于多肽的内源性对应物在体内是动态变化的，因此能够区分并排除内源性分子干扰分析方法是很必要的。

（4）稳定性的影响

多肽类产品的稳定性问题是在生物分析方法开发中常见的问题，尤其是一些缺乏修饰基团或多肽两端缺乏保护性基团的肽类分子。许多分子在高温、冻存、震荡或酸碱条件下，脆弱敏感，甚至降解或构象变化为生物分析方法各种细节性的质量控制等都带来挑战。

针对分子量小，难以制备特异性的高效价抗体的挑战，我们可以采取利用大分子抗原作为载体与多肽进行偶联的免疫策略，并尝试不同的免疫佐剂来激发机体的免疫反应，产生抗体。必要时也可考虑多肽抗原的同源串联重组表达；免疫时尽可能选择与多肽分子同源性相距远的动物种属免疫。

对于多肽分子的内源性对应物的干扰，早做准备，为具有优质选择性的抗体制备提供充足时间，从而构建一个非常特异的针对外源性药物分子的方法，必要时尽可能采用对内、外源性分子分别开发方法以计算扣除内源性分子；也可以结合对所分析的药物和内源性对应物结构和性质上差异点的认识，针对性采取策略消除内源性分子。

针对多肽分子稳定性差、易降解的挑战，有以下方法进行应对，如采样时，选择好抗凝剂或酶抑制剂防范药物降解，利用玻璃管或添加不同的表面活性剂防止多肽的吸附或聚集等。在分析实践中用于配制工作液或储备液的各缓冲液配方很重要，美迪西生物技术药物分析部门有好多基于经验的试剂配方，可以在实践中供大家合作试用。

提高方法的灵敏度可以基于不同的技术平台来开发方法，一般来说，电化学发光法比化学发光，化学发光比荧光，荧光比普通可见光吸收法更容易实现较高的灵敏度。基于不同的信号模式，选用不同的分子标记方式。同样的试剂材料，基于不同的Assay Format改变也可以改善灵敏度。另外基于底物的变化和信号放大系统的应用或组合应用也可以实现灵敏度的提高。

检测平台的优势并非绝对，基于经验和原理将不同策略组合运用尤为重要。在多肽类生物技术药物分析上，美迪西生物技术药物分析部科灵活运用ELISA, ECL, TRFIA, CLIA, IF, IP, CoIP, qPCR, FACS, ELISpot, 酶学等多种方法，支持前沿生物药如蛋白、抗体（单抗、双或多特异性抗体、抗体片段）、ADC、多肽、核酸、疫苗及细胞基因治疗等药物在早期开发、临床前和临床阶段的PK/TK/Immunogenicity(Total ADA& Nab)/Biomarker&Cytokine等研究评价。目前已经支持了多个涉及Her2, Trop2, Muc1等靶点的ADC药物，和EGFR,PCSK9, IL-17A, IL-6, IL-23, VEGF, CD47, TNF-α, CD20，TIGIT等热门靶点及4-1BB, PD1, PDL-1, CTLA4等免疫检查点的单抗或多抗药物，针对CD19类的CAR-T，还有各类融合蛋白、核酸以及众多涉及糖尿病、心血管、骨、肿瘤等相关疾病的多肽类药物不同阶段的研究工作。返回搜狐，查看更多