“Fc Blocking” 流式实验绕不过去的坎

“Fc Blocking”可以不做吗？你是否经常在流式染色实验中听到这样的疑问？

今天小达君就要给大家介绍一下什么是Fc 受体封闭剂，为什么需要做“Fc Blocking”。

在我们流式实验中，通常使用的抗体都是会有Fc段存在的，而细胞如果高表达Fc受体（比如巨噬细胞、B细胞或者肿瘤细胞等），那么在抗体染色的过程中，很有可能抗体Fc段会与细胞表面的Fc受体进行结合，从而产生非特异性的染色结果，最终导致流式实验结果假阳性/假阴性的存在。

因此，在流式实验过程中，除非检测细胞中Fc受体的表达，通常我们会使用纯化的抗体来进行Fc受体的封闭，如图：

那么，是否你还有这样的疑问，我用BSA做封闭可以吗？其实呢，BSA是牛血清白蛋白，可以理解为牛来源的Ab，存在Fc段，用BSA理论上也可以使细胞表面的FcR不再结合流式抗体的Fc段。但是，牛来源的抗体的Fc段不一定能和目的细胞（人源、鼠源等）表面的FcR结合，所以封闭作用是有限的。如图，没有使用封闭剂但使用了BSA跟使用封闭剂的染色结果差异会特别大：

（OCI-AML3细胞系用TruStainFcX（Cat#101319）封闭（红色TruStainFcX直方图）以及用5%BSA封闭（蓝色BSA直方图）后，染APC-CD11b（cat#101211,cloneM1/70）结果）

因此，Fc受体的封闭需要使用专门针对于目的细胞的抗体效果是比较好的。

现在，你知道为什么需要做Fc Blocking了吧？接下来，小达君要给大家简单介绍一下BioLegend最新推出的受体封闭剂TruStainFcX™ PLUS（Cat#156603）。它可有效防止抗体与小鼠细胞的非特异的结合。其克隆号（clone：S17011E）染色结果更优于之前的Fc受体封闭剂 TruStain FcX™（Cat#101319））克隆号（Clone:93），并且从抗体的用量上来说大大减少，可节约实验成本。

（将小鼠脾脏细胞分别用TruStainFcX TM PLUS（0.25μg/test，紫色填充直方图），TruStainFcX TM（克隆93,1μg/test，红线）封闭之后用CD90.2FITC染色，与未处理的小鼠脾脏细胞（黑线）作比较。结果显示TruStainFcXTM PLUS封闭效果更优。）

Description

Size

Cat. No.

TruStain FcX™ PLUS (anti-mouse CD16/32) Antibody

50 μg/500 μg

156603/156604

感兴趣的话，赶快来试试吧！！！

★更多Fc阻断试剂的信息：biolegend.com/flow_controls