生物化学与分子生物学实验室

功能作用：

生物化学与分子生物学实验室是为研究生和本科生进行实验教学、学生进行实验方法和实验技能系统训练的提供场所。学生通过自己动手获取相关知识、扩大知识视野，增强实验技能。以科研促进教学，将科研方面取得的、成熟的新实验技术引入学生实验教学中，培养科研方法和科研思路和。实验室为临床医学5+3一体化、实验室面向临床医学、基础医学、口腔医学、预防医学、康复医学、麻醉学、药学、药物制剂等二十多个专业开课，承担《生物化学与分子生物学实验》、《基础医学综合实验》、《基础医学实验基本技能》、《分子生物学新技术》等5门本科课程以及《高级生物化学》、《S1核酸技术》、《S2蛋白质技术》等3门研究生课程，共开设20多个实验项目，每年完成约12万生学时数的实验教学量。

实验项目：

生化与分子生物学实验室：生物化学与分子生物学4项18学时、5项36学时、 Biochemistry and Molecular Biology4项36学时、高级生物化学3项12学时、分子生物学实验技术2项36学时、基础医学综合实验（生化部分）2项18学时、基础医学实验基本技能4项16学时、分子生物学新技术7项54学时、核酸技术4项28学时、蛋白技术1项7学时。

实验项目、类型和内容：

类型

顺序

实验项目

学时

实验内容

生物化学与分子生物学

1

分光光度法

4

1.生化实验技能和基本操作：玻璃器皿的洗涤与干燥，移液器的使用，溶液的混匀，离心机的使用，生物大分子的制备与鉴定

2.分光光度法原理及可见、分光光度计的使用

2

双缩脲法测定蛋白质含量

4

双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和标准曲线的绘制

3

酶Km值的测定

5

酶的底物专一性 /PH、温度、激活剂与抑制剂对酶活力的影响

4

聚丙烯酰胺凝胶电泳

5

1.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理和方法

2.LDH同工酶分离方法

生物化学与分子生物学

1

分光光度法与蛋白质含量测定

5

1.生化实验技能和基本操作

2.分光光度法原理及可见、分光光度计的使用3.双缩脲法、 Lowry法、紫外分光光度法、考马斯亮兰结合法测定蛋白质浓度及特点

2

碱性磷酸酶动力学分析

5

1.底物浓度对酶促反应速度的影响

2.酶Km值的测定原理并通过实验求出酶Km值

3.酶抑制剂型别的判定

3

蛋白质的电泳技术

8

1.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.测定蛋白质分子量

4

代谢综合实验（激素对血糖的影响，血脂的测定）

9

1.通过动物实验掌握体内代谢研究方法

2.了解胰岛素对血糖、血脂浓度的影响及其机制

3.邻甲苯胺法和葡萄糖酶法测定血糖的方法原理及临床意义、血脂测定

5

逆转录PCR法分析鼠肝糖代谢基因转录水平

9

1.肝组织RNA的提取、RNA分离纯化的原理和方法

2.聚合酶链反应的原理和方法、PCR扩增仪，荧光分析仪的使用

3.琼脂糖凝胶电泳技术

Biochemistry and Molecular Biology

1

Spectrophotometric techniques 分光光度技术

9

1.生化实验技能和基本操作：玻璃器皿的洗涤与干燥，移液器的使用，溶液的混匀，离心机的使用，生物大分子的制备与鉴定

2.分光光度法原理及可见、分光光度计的使用

2

Analysis of enzyme kinetics 酶动力学分析

9

1.底物浓度对酶促反应速度的影响

2.酶Km值的测定原理并通过实验求出酶Km值

3.酶抑制剂型别的判定

3

Techniques of protein purification and characterization 蛋白质纯化与鉴定技术

9

1.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.测定蛋白质分子量

4

Polymerase chain reaction 聚合酶链反应

9

1.肝组织RNA的提取、RNA分离纯化的原理和方法

2.聚合酶链反应的原理和方法、PCR扩增仪，荧光分析仪的使用

3.琼脂糖凝胶电泳技术

高级生物化学

1

GST-融合蛋白的分离纯化

4

GST蛋白的分离纯化方法、融合蛋白的诱导表达

2

分离蛋白的纯度鉴定

4

利用SDS-PAGE方法鉴定蛋白纯化

3

分离蛋白的生物学活性

4

酶活性测定的新型实验方法：微量法检测碱性磷酸酶的活性

分子生物学实验技术

1

质粒DNA的提取和纯化

DNA电泳检测

DNA片段的转化

重组子的筛选和鉴定

电教一：核酸的分离与纯化

电教二：基因克隆

13

1.碱裂解法提取质粒DNA

2.琼脂糖凝胶电泳观察、判断提取结果

3.细菌感受态的制备

4.质粒转化原理、摇菌及涂板

5.蓝-白筛选的原理、结果分析

2

DNA限制性内切酶酶切分析

RNA提取和RT-PCR

电教三：聚合酶链反应

电教四：外源基因在原核和真核细胞中的表达

电教五：DNA序列测定

13

1.肝组织中基因组DNA的提取

2.DNA限制性内切酶酶切分析

3.电泳观察酶切条带

4.RNA分离纯化的原理和方法、定量技术

5.聚合酶链反应的原理和方法

6.PCR扩增仪，荧光分析仪的使用

基础医学综合实验

1

感受态细菌的制备、转化和筛选

9

1.细菌感受态的制备

2.质粒转化原理、摇菌及涂板

3.蓝-白筛选的原理、结果分析

2

质粒DNA的提取和DNA限制性内切酶消化

9

1.碱裂解法提取质粒DNA

2.琼脂糖凝胶电泳观察、判断提取结果

基础医学实验基本技能

1

生化常规玻璃器皿处理及常用溶液配制

4

1.生化与分子生物学实验室的一般操作及安全规则；

2.实验室常用玻璃仪器分类；

3.生化常规玻璃器皿的处理和使用以及常用溶液的配制。

2

核酸的分离与鉴定

4

1.琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法;

2.核酸染色的方法。

3

聚丙烯酰胺凝胶电泳（LDH）

4

1.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理和方法;

2.乳酸脱氢酶同工酶分离方法和显色原理。

4

胶回收

4

1.DNA片断纯化的原理和方法；

2.利用试剂盒从凝胶中回收DNA产物的方法。

分子生物学新技术

1

1. 质粒DNA的提取和纯化

2.DNA电泳检测，纯度和浓度的测定

8

1.碱裂解法提取质粒DNA

2.琼脂糖凝胶电泳观察、判断提取结果

2

1. 基因组DNA的提取和纯化

2. DNA限制性内切酶酶切分析

8

1.肝组织中基因组DNA的提取

2.DNA限制性内切酶酶切分析

3.电泳观察酶切条带

3

1.DNA片段的连接及转化

2.重组子的筛选和鉴定

7

1.细菌感受态的制备

2.质粒转化原理、摇菌及涂板

3.蓝-白筛选的原理、结果分析

4

1.RNA的分离纯化 2.逆转录PCR

7

1.RNA分离纯化的原理和方法、定量技术

2.聚合酶链反应的原理和方法

3.PCR扩增仪，荧光分析仪的使用

核酸技术S1

1

1. 质粒DNA的提取和纯化

2.DNA电泳检测，纯度和浓度的测定

7

1.碱裂解法提取质粒DNA

2.琼脂糖凝胶电泳观察、判断提取结果

2

分子克隆（一）

1. 基因组DNA的提取和纯化

2. DNA限制性内切酶酶切分析

7

1.肝组织中基因组DNA的提取

2.DNA限制性内切酶酶切分析

3.电泳观察酶切条带

3

分子克隆（二）

1.DNA片段的连接及转化

2.重组子的筛选和鉴定

7

1.细菌感受态的制备

2.质粒转化原理、摇菌及涂板

3.蓝-白筛选的原理、结果分析

4

1.RNA的分离纯化

2.逆转录PCR

7

1.RNA分离纯化的原理和方法、定量技术

2.聚合酶链反应的原理和方法

3.PCR扩增仪，荧光分析仪的使用

蛋白技术S2

1

蛋白定量分析

Western-blot检测

7

1.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.测定蛋白质分子量

3.Western-blot的基本原理

4.Western-blot的实验操作