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完整的单细胞分析流程

2024-07-16 09:31| 来源: 网络整理| 查看: 265

背景介绍

Bioconductor项目的主要优势之一在于使用通用数据基础结构,该数据基础结构可实现跨越R包的相互操作性。 用户应该能够使用来自不同Bioconductor软件包的功能来分析其数据,而无需在格式之间进行转换。 为此,SingleCellExperiment类(来自SingleCellExperiment包)数据结构可以当做在70多个单细胞相关的Bioconductor包进行数据分析的“通用货币”。 此类实现了一个数据结构,该数据结构存储了我们单细胞数据的各个方面-逐个基因表达数据,每个细胞meta数据和每个基因注释(图1),并以同步方式对其进行操作。

图1:SingleCellExperiment类的结构概述。 分析的每一行对应于rowData的一行(粉红色阴影),而分析的每一列对应于colData和reduceDims的列(黄色阴影)

使用任何依赖于SingleCellExperiment类的软件包时,都会调用预先安装的SingleCellExperiment软件包,但也可以如下方式安装(和加载)该软件包:

BiocManager :: install('SingleCellExperiment')

另外,我们还会使用scater和scran软件包以及CRAN软件包uwot的某些功能(也可以通过BiocManager :: install方便地安装它们)。这些功能将根据需要通过 :: 进行调用。

BiocManager :: install(c('scater','scran','uwot'))

通常,我们将SingleCellExperiment包加载到我们的R会话中。这样就避免了在函数调用前加上::的前缀,特别是对于在整个分析工作流程中大量使用的包。

libarary(SingleCellExperiment)

SingleCellExperiment对象中的每条(元)数据都由一个单独的“插槽”表示。 (此术语来自S4类系统,但现在并不重要。)如果我们将SingleCellExperiment对象想象为一艘货船,则可以将这些插槽视为具有不同内容的单个货箱,例如,某些插槽装载数字矩阵,而其他矩阵可能装载数据框。在本章的其余部分,我们将讨论可用的插槽,它们装载的数据格式以及如何与之交互。

存储初始的实验数据 1填充assays插槽

要构建基本的SingleCellExperiment对象,我们只需要填充assays槽即可。其中包含主要数据,例如测序计数矩阵,其中行对应于特征(基因),列对应于样本(细胞)(图1,蓝色框)。让我们从十个基因中生成三个单元格的计数数据开始,从简单开始:

counts_matrix


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