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额外信号放大的附加层 与其他方法不同(参见直接与间接方法),这些技术为放大信号而增加了另一层。 附加层将一抗与多个酶或荧光团相关联,显著提高了灵敏度。 例如,如果使用生物素化的二抗: 直接间接ABCLSAB第一步偶联一抗未标记的一抗未标记的一抗未标记的一抗第二步偶联一抗生物素二抗生物素二抗第三步抗生物素蛋白-生物素复合物链霉抗生物素蛋白复合物我应该使用什么方法? 在过去几年中,LSAB方法比ABC更受欢迎。 主要原因是链霉抗生物素蛋白的非特异性结合较低。 但是LSAB方法还有其他好处,如下所示: ABCLSAB注释特异性更低更高由于抗生物素蛋白具有碳水化合物基团和高等电点(pI),显示出非特异性结合。 相反,链霉抗生物素蛋白缺乏碳水化合物基团并具有更中性的pI。灵敏度高高两种方法都比直接或间接检测具有更高的灵敏度。组织通透更低更高LSAB方法中的复合物尺寸较小,具有更好的组织通透效果。样品处理更复杂更简单两种方法都需要三个孵育步骤,但ABC方法需要另外将抗生物素蛋白与报告酶进一步孵育。使用生物素化抗体的局限性 尽管这些方法被广泛采用,但它们也有其局限性。 组织中内源性生物素的存在可以显著增加背景信号。 因此,在生物素高表达的组织如肝和肾中封闭内源性生物素特别重要。 请注意,由于这些组织样本中含有大量的内源性生物素,所以推荐用非生物素化的方法来检测。 找到适合您研究的产品 我们提供您需要的生物素抗体和生物素结合蛋白。 我们的产品包括: 一抗: 兔多克隆抗体 小鼠单克隆抗体 二抗: 抗兔抗体 抗小鼠抗体 蛋白: 抗生物素蛋白 链霉抗生物素蛋白 下图展示了生物素化抗体在免疫组织化学(IHC)和ELISA中的使用实例。 |
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