SuperSignal HRP 化学发光底物

Thermo Scientific SuperSignal West Femto 超敏化学发光底物可实现低飞克级的蛋白质印迹检测。当与优化的抗体浓度和封闭缓冲液结合使用时，SuperSignal West Femto 底物能够检测到低丰度目标蛋白，即使目标蛋白丰度太低而无法用入门级 ECL 底物观察到。

使用 SuperSignal West Femto 底物进行真正的飞克级检测，。 将纯化的 IκB 从 100 到 1 fg 进行一系列稀释，然后在 4-20% 小型胶上进行电泳。将蛋白质转印到 PVDF 膜上，在室温下使用 StartingBlock 封闭缓冲液封闭 1 小时。使用1:1,000 稀释的兔抗 IκBα（1 mg/mL），4°C 下过夜孵育，然后在室温下，使用 1:200,000 稀释的 HRP 山羊抗兔 lgG（1 mg/mL）二抗孵育 1 小时。将该膜在 Thermo Scientific CL-XPosure 胶片下曝光 1 分钟。

使用 SuperSignal West Femto 底物获得高灵敏度和长信号持续时间。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 NIH3T3 裂解液。泳道 1 包含 5 µg 的 NIH3T3 裂解液。制备五组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号 84731）。用含 5％ 牛奶的 TBST 缓冲液封闭膜。将膜与抗 Erk1 （货号MA1-13041) 一起孵育，一抗浓度为 0.2 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）一起孵育，二抗浓度为5 ng/mL。根据每个制造商的说明书，加入 SuperSignal West Femto 底物（货号34096），Clarity™ Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories, Inc.）或 Luminata™ Forte Western HRP 底物（EMD Millipore Corp.）或 Immobilon™ Western 化学发光 HRP 底物（EMD Millipore Corp.）后检测印迹。印迹同时曝光两分钟，在一张8 x 10 英寸的 CL-XPosure 胶片（货号34091）上进行采集。

SuperSignal West Femto 底物 可让你在使用更少抗体的同时获得更多信息。 A431 细胞裂解液于电泳还原样品缓冲液中依次稀释为 5、2.5、1.25、0.625、0.3125 和 0.15625 µg/孔，蛋白上样量为 10 µL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。将膜用 TBST 中的 5% 牛奶封闭，并切成三个膜条以优化抗体稀释度。将膜与 β-连环蛋白（货号MA1-300) 一起孵育，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号31460）在适当稀释比下一起孵育。加入 SuperSignal West Femto 底物（货号34095）后检测印迹。在 CL-XPosure 胶片，8 x 10 英寸（货号34091）和 myECL 成像仪（货号62236）上采集10秒曝光的结果。将 myECL 成像仪的条带图进行反转和对比（黑色=62,000，白色=65,535，gamma=1.0）。