Genome Biology

 基因组DNA修饰或mRNA靶向失活是研究基因功能的一种广泛应用的策略，而Trim-Away技术是最近发展起来的直接降解内源性蛋白质的技术。Trim 21是一种E3泛素连接酶，它与抗体的Fc区域有很高的亲和力，并且可以招募泛素-蛋白酶体系统，以降解目标蛋白。

为了确定Trim-Away技术能否在体内降解斑马鱼胚胎中的蛋白质，研究人员开发了瞬时表达增强绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼。EGFP注射后迅速降解，半衰期为16 min。并且Trim 21和抗-EGFP抗体被除。当Trim21和抗EGFP抗体完全降解后，EGFP的表达逐渐恢复。Trim-Away-EGFP的降解取决于Trim 21和抗EGFP抗体的剂量。然后，研究人员评估了Trim-Away是否可以通过靶向Ddx19B来降解内源性斑马鱼蛋白，Ddx19B是mRNA输出、翻译和基因组稳定性所必需的一种蛋白质。注射TRIM21和抗-Ddx19B抗体后1h，引起了Ddx19B的下调。

Dicer 1是RNA干扰途径的重要组成部分，是miRNA生物发生的关键环节。尽管Dicer 1突变型斑马鱼保留了多达10 dpf的miRNA前处理活性，除了7-10dpf的发育延迟外，没有明显的缺陷，但吗啡介导的Dicer 1基因被下调了。 斑马鱼的发育停滞于2 dpf，说明母鱼Dicer 1mRNA在胚胎发生中的重要作用。此外，母合子Dicer 1突变体表现出比Dicer 1吗啡基斑马鱼更早、更严重的形态缺陷，表明该突变体 Nal Dicer 1蛋白调控早期胚胎发生。将TRIM 21和抗Dicer 1抗体注射到斑马鱼卵黄中，在0 hpf条件下，会导致Dicer 1蛋白的快速下调。

研究数据证明，Trim-Away可以用于研究斑马鱼胚胎发生的前几个小时的蛋白质功能。此外，Trim-Away还可以对母系蛋白质以及将TRIM 21/抗靶标抗体注射到单细胞胚胎后的实际数小时表达的蛋白质进行功能分析。因此，Trim-Away是确定斑马鱼发育过程中蛋白质功能的有力工具。