细胞学堂 | 您所在的位置:网站首页 › sh培养基配方表 › 细胞学堂 |
SH-SY5Y细胞于1970年构建,是骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经3次克隆后得到的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。如今,SH-SY5Y细胞已经是脑科学研究中最常用的细胞系之一了。 但很多人在SH-SY5Y细胞培养的过程中,总会遇到各种问题。今天,普诺赛来为大家一 一解答。 SH-SY5Y细胞基本信息 细胞名称SH-SY5Y (人神经母细胞瘤细胞)细胞别称SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y种属及来源人(女性,4岁)脑神经母细胞瘤,转移部位骨髓生长特性半贴半悬生长形态上皮细胞样生长培养基MEM/F12+15% FBS+1% P/S培养环境气相:95%空气;5%CO2温度:37℃推荐传代比例1:3-1:4推荐换液频率48小时/次冻存液配方55% MEM/F12+40% FBS+5% DMSO▲产品详情 细胞系:SH-SY5Y 培养基:CM-0208 SH-SY5Y细胞培养常见问题及解决方案 收货篇 常温运输过程中,细胞不免受到震荡和温度变化的影响,出现皱缩、聚团甚至脱落的现象。遇到这种情况,不用紧张,只要正确处理,细胞就能恢复正常生长。 收货时皱缩 常温细胞收货后,把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时即可。如果4小时后细胞仍然没有铺展开,密度适中的前提下可以静置过夜(过夜前倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松)。 收货时聚团 常温细胞收货后,先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态,再进行传代。传代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。 收货时脱落 常温细胞收货后,先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。脱落后的细胞通常聚团漂浮,通过离心将漂浮的细胞团收集起来,在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。 贴壁细胞常规方法消化下来,和处理好的脱落细胞合并,混匀后铺板。 SH-SY5Y脱落处理步骤: 1. 1200rpm(约250g)3min离心收集细胞,去除旧培养基; 2. PBS 重悬细胞,再次 1200rpm(约250g)3min离心,去除PBS; 3. 加入 1mL左右 0.25%胰酶重悬细胞,吹打1-2下吹起沉淀即可; 4. 放入细胞培养箱约 1-3min; 5. 用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散; 6. 迅速加入 3-5mL含血清的培养基混匀以终止消化; 7. 1200rpm(约250g)3min离心,去除胰酶; 8. 加入新鲜培养基按合适比例接入无菌培养器皿中; SH-SY5Y细胞收货时皱缩、脱落
SH-SY5Y细胞处理后第三天 SH-SY5Y细胞培养篇 SH-SY5Y细胞生长缓慢。在细胞培养过程中,有以下几点需要注意。
能否使用DMEM/F12 MEM/F12和DMEM/F12都可以培养SH-SY5Y细胞培养,并且都有相应的文献支持。但这两种培养基培养出来的形态会有细微差异。 另外,使用品质好的胎牛血清将极大改善细胞生长状态。 培养基容易变黄 因其神经母细胞瘤的特性,SH-SY5Y细胞成簇生长,饱和密度大。有时显微镜下看着密度不高,但细胞簇实际密度大,所以细胞培养基很快就变黄了。这时候,需及时换液。 生长异常缓慢 当SH-SY5Y细胞培养一周都无法传代时,可以将细胞消化下来,接种到更小的容器中,人为增加细胞密度,从而促进细胞生长。平时传代时也要注意接种密度不能太低。 传代注意事项 不建议连续消化细胞,连续消化细胞会导致细胞状态变差。传代时消化时间不宜过长,通常1-3min即可,若细胞解离太快可适当用PBS稀释胰酶。吹打细胞时,动作轻缓一些,减少对细胞的物理刺激。 SH-SY5Y正常生长照片 形态篇 SH-SY5Y细胞培养时,贴壁细胞和悬浮细胞同时存在,贴壁细胞呈上皮样,有短触角延伸出来,倾向于成簇生长,容易成团。 悬浮细胞过多:SH-SY5Y细胞生长时有少量悬浮细胞,是正常现象。 如果出现大量悬浮的细胞,就需要引起注意了。 处理方法:换液时将悬浮细胞离心收集,新鲜培养基重悬后接种回原瓶/原皿。当贴壁细胞生长状态良好、密度适中时,可以舍弃悬浮细胞。 成团严重:SH-SY5Y细胞非常敏感,在受到温度、化学或物理刺激后容易出现成团现象。一个视野下,有少量成团现象,无需特殊处理。成团几乎没有铺展开的细胞时,就需要按以下方法特殊处理一下了。 成团较严重的SH-SY5Y细胞 处理方法 方法1:低密度接种,用0.125%的低浓度胰蛋白酶消化细胞(时间不超过5min),按1:6比例传代接种,并换新的培养器皿。 延长换液时间,3天换液一次,防止细胞脱落。 方法2:使用多聚赖氨酸包被的培养器皿,以加快细胞贴壁速度,降低细胞聚集成团的几率。 方法3:重新铺板,并更换新配制的培养基,并加大血清比例(不超过20%) 方法4:接种时,减少培养基量(如T25加3mL)以加快细胞贴壁速度,等待细胞贴壁后(约8-12小时),再补加培养基。
预防成团的方法: Ø 控制细胞密度不超过80%,当密度到达或超过80%及时传代;传代时切勿暴力吹打,避免对细胞造成机械刺激 Ø 使用质量好的细胞培养基和胎牛血清,减少内毒素等有害物质对细胞的刺激 Ø 请勿频繁把细胞从培养箱拿出,气温低时需开暖气维持细胞房温度;使用PBS、培养基前37度预热,以避免温差对细胞造成刺激 温馨提醒: 如果您想要了解或选购细胞系或者原代细胞,请点击我要选购,有任何疑问也可以点击右方的在线咨询,专业技术人员将为您提供解答。 |
今日新闻 |
推荐新闻 |
专题文章 |
CopyRight 2018-2019 实验室设备网 版权所有 |