怎样判断你提取的RNA质量好坏?

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吸光度法测RNA总量

即紫外分光光度计检测，经常使用。

280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、溶液浑浊度、盐浓度和蛋白等有机物的值。我们只看OD260/OD280。理论上，纯RNA情况下的OD260/OD280的值为2，可接受的范围为1.8-2.0。纯的DNA情况下的OD260/OD280的值为1.8，可接受的范围是1.6-1.8。

一般认为RNA中的蛋白或是其他有机物的污染是可以接受的，当R2.2时，说明RNA已经水解为单核酸。一般的，如果你能做到1.9-2.0之间，说明RNA纯度已经很高了。但是如果你采用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会＞2(一般应＜2.2的)。

个人推荐的办法是严格采用阈值1.8-2.0作为判定标准，不符合的RNA样品丢弃，重新提取，这样才能最小化误差。

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电泳法谱测RNA完整性

一般而言，RNA琼脂糖实验是为了检测RNA的完整性，但是我们也可以从中看出RNA的质量好坏。

我们的目的并不是要检测RNA的分子量，RNA无需变性，所以采用普通的1%含EB琼脂糖凝胶(含EB)即可满足要求。跑胶结束后，在紫外灯的照射下，我们可以得到如下的图。

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保温法RNA是否酶污染

上面2种方法都是采用物理的方法进行检测，但是我们无法得知所抽提的RNA是否有RNA酶污染。很多人没有注意这一点，认为使用了无RNA酶实验器材，哪里还有RNA酶啊。

事实就是这么悲惨！小编甚至认为这是相关试验失败的重要原因。毕竟，很少有人会意识并且验证这一点。

RNA酶比较顽强，单纯加温也很难灭活，必须使用DEPC。实验室环境中其实存在很多RNA酶，这些酶大多来源于人的呼吸和唾沫。你可以保证自己带口罩实验，但是你可能很难要求同处一室的其他人都带上口罩。很多高质量的实验室会开通PCR专用实验间，他们的实验往往比较顺利。

RNA保温实验原理:

很简单，就是取一点样品，人为的升温并保持一段时间，接着通过琼脂糖跑胶的操作。如果存在RNA酶，那么RNA条带的28S和18S肯定模糊不清，而5S会发亮，并且条带拖尾现象严重。

网上有一份RNA保温试验方法，还是比较好的。贴上来给大家看看。

The end.