细胞产品质量控制：浓度和活率的检测方法，你知道几种？

撰文：孙锦霞（明鉴细胞检测）

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近年来，细胞治疗已经成为一种非常有前景的治疗手段，在临床应用方面显示出巨大的应用潜力。细胞治疗包括免疫细胞治疗和干细胞治疗。细胞产品被称为“活”的药物，制备流程复杂，质量控制贯穿研发到临床的各个方面。

国家药品监督管理局药品审评中心发布的《人源性干细胞产品药学研究与评价技术指导原则（征求意见稿）》和《免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》中都指出细胞计数和活率是评价细胞产品的基础和重要指标。因此，需要建立准确的细胞计数及活率检测方法，并建立产品的放行标准。

虽然现在有很多自动化细胞计数仪，但人工计数仍然是最简便易行的方法且被广大实验室使用，大部分智能化的计数仪器所采用的基本原理还是与血球计数板方法一样。仪器只对“标本”负责，上机前仍需要规范的细胞样品准备和加样过程。

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镜检法（血球计数板）

自18世纪以来，使用血球计数板进行显微镜计数，一直被认为是细胞计数的“金标准”。采用标准化的步骤实现单个细胞计数，从而计算细胞的浓度。通过添加台盼蓝染料来确定细胞活率。

血球计数板法为经典的细胞计数方法，可以在不同的情况下具有多功能和适应性。在显微镜下直接测定，操作便捷，成本低，可较为准确了解细胞状态。但是，样品中有较多杂质、碎片时，易被计算在内，导致结果偏高。该方法受主观因素影响较大，对操作人员的经验及操作熟练度有一定要求，不适合多样本、连续检测。

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图像分析法

图像分析法是目前主流的细胞计数法，包括台盼蓝染色法和双荧光染色法，检测原理是基于活细胞细胞膜是完整的。图像分析法可以自动拍照和数据分析统计，适应性强，适用于几乎所有类型细胞的检测。

正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，细胞不被染色。而死细胞的胞膜不完整，通透性增加，可使台盼蓝渗入将细胞染成蓝色。因此，借助台盼蓝染色可以简单、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝染色法操作简单，但其检测原理有一定局限性：

1）细胞活率低于80%时，碎片、杂质、台盼蓝结晶等会干扰计数结果；

双荧光染色法操作简单，不受细胞状态、细胞碎片、背景杂质、无核细胞等干扰。但用于团聚细胞的检测，染色效果对结果影响较大。

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虽然可以进行细胞的绝对计数、且重复性较好。但是，电阻抗法不能检测细胞活率，无法观察到细胞状态，且易受细胞杂质、杂质、气泡等影响。

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流式细胞术操作相对复杂，对人员要求要高，无法直接观察到细胞状态，易受细胞碎片、杂质等影响，所测浓度和活率误差较大。因此，一般不用于细胞计数，多用于细胞群分析，且检测成本较高。

综上，标准化的手动操作步骤、稳定的设备性能测试、准确的细胞识别参数设置、多人多次测试等，对于细胞浓度和活率检测结果的准确性和一致性至关重要。

明鉴细胞检测依据法规要求，参考现有行业检测技术，可提供符合法规规定的细胞浓度和活率检测服务，包括镜检法、台盼蓝染色法、AO/PI双荧光染色法、流式细胞术检测法。同时，我司作为大湾区首个CNAS和CMA双认证的生物制品质量CRO平台，也是目前大湾区首个获得细胞计数和细胞活率两个项目CNAS认可的机构。

作者：孙锦霞

简介：生物医学博士，暨南大学博士后，深圳市后备级人才。现任深圳市明鉴细胞专业技术有限公司质量检测中心总监，CMA和CNAS授权签字人。具有近10年生物药立项、开发及质量检测工作经验，尤为擅长细胞基因治疗药物的开发和质量控制。