核酸知识系列(三) | 您所在的位置:网站首页 › rna提取实验结果分析浓度130 › 核酸知识系列(三) |
RNA的提取条件较DNA要求严格。RNA由于自身结构和RNA酶的存在,极易降解。RNA酶是导致RNA降解的主要物质,RNA酶广泛存在人的皮肤和环境中,此酶非常稳定,常规高温高压灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。 经高压灭菌的一次性使用的塑料制品如试管和离心管等基本上无RNase,可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿经常有RNase污染,使用前必须于180℃干烤8h以上,或用0.1%焦炭酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯、试管和其他用品。DEPC是RNase的强烈抑制剂。同时需要注意的是:DEPC具体致癌性,操作时必须小心。 常用的RNA提取方法,有TRIzol试剂,苯酚,异硫氰酸胍-酚法等: TRIzol法是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂,在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,氯仿离心,异丙醇沉淀RNA。 苯酚法,将细胞置于十二烷基磺酸钠(SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,剧烈震荡,离心形成上层水相和下层酚相,核酸溶于水相。 异硫氰酸胍-酚法:用过异硫氰酸胍与β-疏基乙醇共同作用抑制RNase的活性。异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠作用使蛋白变性,释放RNA,在酸性条件下,DNA同蛋白质一起离心下来,RNA溶在上清中,该方法提取RNA纯度高,完整性好,适合纯化mRNA,逆转录和文库构建。 还有一些试剂盒,如RNA plant plus植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN),总RNA提取试剂盒(Qiagen),总RNA提取试剂盒(Promega),使用简单、快速、高效,均能获得满意结果。 RNA检测:用NanoDrop2000(或更新的产品)测定RNA溶液的OD值,并计算OD260/OD280、OD260/OD230的比值,确定其纯度及浓度: OD260/OD280为1.8~2.2(一般在2.0左右),当 OD260/OD2802.2时,说明 RNA 已经水解成单核酸了; OD260/OD230也可表明 RNA 的纯度,OD260/OD230应>2.0,OD260/OD230 |
今日新闻 |
推荐新闻 |
专题文章 |
CopyRight 2018-2019 实验室设备网 版权所有 |