qRT

qRT-PCR 

逆转录定量

PCR

（

qRT-PCR

）

，是一种应用广泛的研究基因表达模式的方法，尤其是在样品量少或者说非

常珍贵的时候。这种方法主要的优点是范围宽、敏感性高、精确度高，无

PCR

后处理步骤，避免了交叉污

染，且产出率高，可以进行多重检测等。

技术方法简介

所谓的实时荧光定量

PCR 

就是

通过对

PCR 

扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现

对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量

PCR 

反应中，引入了一种荧光化学物质，随着

PCR 

反

应的进行，

PCR 

反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信

号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。

RT-qPCR

实验步骤



反转录

:

依赖反转录酶将

RNA

反转录成

cDNDA; 



扩增

:

用

PCR

的方法扩增

cDNA; 



检测

:

实时检测和定量扩增的产物

. 

RT-qRCR

影响分析可靠性关键点

: 



分析结果依赖于模板的数量、质量以及合理的检测方法设计

; 



反转录反应的非标准化影响试验的稳定性

; 



数据分析应该高度客观，如果不合理的分析，从分析结果中会得到混淆的错误结果

; 

因此通过对

RT-qPCR

的每一组分进行质量评价以达到最小化变异性，最大化可重复性，而且还需要沿用