pH对酶活性的影响

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一、实验名称：

pH

对酶活性的影响

二、目的与要求：

1

、了解

pH

对酶活性的影响。

2

、学习测定酶的最适

pH

的方法。

三、实验原理：

酶活性受环境

pH

的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的

pH

范围内才表现它的活

性。一种酶表现其活性最高时的

pH

值，称为该酶的最适

pH

。低于或高于最适

pH

时，酶的

活性逐渐降低。不同酶的最适

pH

值不同，例如，胃蛋白酶最适

pH

为

1.5

～

2.2

，胰蛋白酶

的最适

pH

为

8

等。

酶的活性同时还受底物性质和缓冲液性质的影响。

例如，

唾液淀粉酶的最适

pH

约为

6.8

，

但在磷酸缓冲液中，其最适

pH

为

6.4

～

6.6

，在醋酸缓冲液中则为

5.6

。

四、试剂：

1

、

0.3%

氯化钠的

0.5%

淀粉溶液（新鲜配制）

2

、稀释

200

倍的新鲜唾液

3

、

0.2M

磷酸氢二钠溶液

4

、

0.1M

柠檬酸溶液

5

、碘化钾

-

碘溶液

五、器材：

1

、试管与试管架

2

、移液枪（

1000

微升）

3

、锥形瓶（

50

毫升）×

8 

4

、烧杯（

100

毫升）

5

、白瓷板

6

、恒温水浴锅

7

、滴管

8

、秒表

六、实验步骤：

取

8

个

50

毫升锥形瓶，编号。按上表中的比例，用吸量管添加

0.2M

磷酸二氢钠溶液

和

0.1M

柠檬酸柠檬酸溶液，制备

pH5.0

～

8.0

的

8

种缓冲溶液。

取

9

支干燥的试管，编号。将

8

个锥形瓶中不同的

pH

的缓冲液各取

3ml

，分别加入相

应的号码（

1-8

号）的试管中。然后，再向每个试管中加入

0.5%

淀粉溶液

2ml

。第

9

号试管

与第

5

号试管的内容物相同。

向第

9

号试管中加入稀释

200

倍的唾液

2ml

，

摇匀后放入

37

℃恒温水浴中保温。

每隔

1

分钟由第

9

号试管中取出一滴混合液，置于白瓷板上，加一滴碘化钾

-

碘溶液，检验淀粉的

水解程度，待结果呈橙黄色时，取出试管，记录保温时间。注意，掌握第

9

号试管的水解程

度是本实验成败的关键之一。

以

1

分钟的间隔，依次向第

1

至第

8

号试管中加入稀释

200

倍的唾液

2ml

，摇匀，并以

1

分钟的间隔依次将

8

支试管放入

37

℃恒温水浴中保温。

然后，

按照第

9

号试管的保温时间，

依次将各管迅速取出，并立即加入碘化钾

-

碘溶液

2

滴，充分摇匀。观察各管的呈现的颜色，

判断在不同的

pH

值下淀粉被水解的程度，可以看出

pH

对唾液淀粉酶活性的影响，并确定