Histone H3 (H3C1)靶点介绍及实验小贴士

   Histone H3是核小体的核心成分。

   核小体将DNA包裹并压缩成染色质，限制了DNA接近细胞内其它细胞器，它们的功能需要DNA作为模板。

   组蛋白在转录调控、DNA修复、DNA复制和染色体稳定性中发挥核心作用。

   DNA可访问性是通过组蛋白的一系列复杂的翻译后修饰(也称为组蛋白编码)和核小体重构来调控的。

   Histone H3是核小体的核心成分，超声处理的样品有助于富集更多的靶标蛋白，特别是核蛋白。

   组蛋白通过不同的方式进行翻译后修饰，因此观察到的Histone H3的条带大小可能与预测的条带大小不一样。

   Histone H3是一个分子量较小的蛋白，其预测分子量大小约为15 kDa。

   在S期表达，在分化过程中，随着细胞分裂减慢，表达量急剧下降。

   细胞核

图二：Histone H3的ICC实验结果图，Anti-Histone H3抗体产品（ab176842）。绿色：Histone H3，红色：Tubulin，蓝色：DAPI。

   人（P68431）：15 kDa（预测）

   小鼠（P84228）：15 kDa（预测）

   大鼠（P84245）：15 kDa（预测）

   甲基化（三甲基化、二甲基化和单甲基化）

   乙酰化，磷酸化，泛素化，瓜氨酸化

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   观察到的条带大小可能与预测大小不符。

   超声破碎样品有助于富集更多靶标蛋白，从而解决无信号或弱信号现象。

   Histone H3: HeLa (Human cervix adenocarcinoma epithelial cell) 全细胞裂解液 (ab150035)。

   更多阳性对照请参考我们的产品说明书推荐。

关键控制点

     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本制备

     添加足够量的复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。

     使用复合磷酸酶抑制剂，防止靶标蛋白被去磷酸化。

     超声破碎样本，以获得更多的靶标蛋白。

     整个样本制备过程尽量在冰浴进行，以防止蛋白降解。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

   电泳

     使用15%的分离胶

     至少上样20μg总蛋白进行电泳。

   转膜

     推荐使用0.22 μm PVDF膜。

     建议转膜缓冲液中含20%甲醇。

     强烈建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功。