答疑解惑

在《结直肠癌及其他相关实体瘤微卫星不稳定性检测中国专家共识》中提到[1]，微卫星不稳定（Microsatellite Instability，MSI）通常是由DNA错配修复功能出现异常，导致基因组中短串联重复（STR）序列的长度或碱基组发生变化，呈高突变的表型。MSI根据不稳定的程度分为三类：高度不稳定（MSI-H）、低度不稳定（MSI-L）、稳定（MSS），免疫检查点抑制剂是否受益的关键因素是MSI-H与否，与具体癌种无关。

MSI检测的方法有哪些？来自专家共识的总结

MSI-H的发生率因不同癌种会有所差异，共识指出[1]，发生率较高的实体瘤包括子宫内膜癌（20%-30%）、胃癌（15％-20％）和结直肠癌（12％-15％，Ⅳ期结直肠癌４％-５％）等。我司MSI单项检测采用的2B3D位点的技术方法，为共识中的金标准-PCR法，也称作PCR-毛细管电泳法，它是先用PCR扩增5个MS位点，再用毛细管电泳技术检测MS的长度变化，分析MSI结果。共识中明确了PCR法检测MSI指标需要检测组织标本和对照标本，因为MSI指标代表是肿瘤细胞中的微卫星状态，需要对照样本用于区分正常细胞，准确评估肿瘤细胞的微卫星状态。因此，在使用PCR-毛细管电泳技术检测MSI时，别忘记同步送检血液或者口腔拭子等对照样本！

另外，NGS法检测MSI是共识推荐准确性高的技术，NCCN结直肠癌指南也提出，MSI可通过经验证的NGS panel进行，尤其对于需要同时检测RAS/BRAF等基因突变的转移性CRC患者。我司也提供NGS方法学检测MSI指标，还能同步指导靶向、化疗等多种治疗方案，并且经大样本量的性能验证，与PCR法的结果高度一致。

图1. 摘自《结直肠癌及其他相关实体瘤微卫星不稳定性检测中国专家共识》

PCR-毛细管电泳法检测MSI，怎么判定检测结果？

相信2B3D方法大家有所了解，检测5个微卫星位点 (BAT25、BAT26、D5S346、D2S123 和D17S250)，是结直肠癌CSCO指南一致推荐的MSI检测方法。指南确定了判定标准：5个位点中2个及2个以上的位点不稳定为 MSI-H；1个位点不稳定为 MSI-L；所有位点均稳定为MSS。而MSI-H的结果作为良好的免疫疗效和预后预测指标，往往是理想的检测结果！

图2. CSCO结直肠癌诊疗指南推荐2B3D检测方法

拿到MSI检测报告后，怎么看MS检测图谱？

得知MSI-H的判读标准后，再看MSI检测报告，你会发现报告中客观提供了检测的毛细管电泳图谱，从检测真实性和准确性两个角度说明报告的合格性，但你可能会难以理解判读这些图片。那我举例说说，辅助你成为解读能手：

首先，检出所有位点均稳定（MSS）（图3）：

图3.MSS结果，所有MS位点，组织和对照图谱一致

其次，检出1个位点不稳定（MSI-L）（图4）：

图4. MSI-L结果，仅一个MS位点，组织对照不一致

最后，检出所有位点均不稳定（MSI-H）（图5）：

图5. MSI-H结果，所有的MS位点，组织对照均不一

对的，你没看错，5个MS位点都不稳定也是存在的，就有客户对这种结果提出过疑问，我们理解疑问并坚信客观结果，同时依据循证医学，积极查找相关资料学习。

MSI-H结果中，检出几个MS位点更为常见？

通过调研文献，5个MS位点均不稳定的这种现象确实是比较常见的。例如，德国汉诺威医学院一篇研究发现[2]，针对MSI-H患者中，在MS位点不稳定的个数，用Promega（BAT-25, BAT-26, NR-21, NR24和NR-27）技术检出的5个不稳定位点的比例确实要高于2-4个位点（65% vs 35%），并且5个位点不稳定的比例在结直肠癌中比子宫内膜癌更为常见！另一项比利时根特大学医学院采用2B3D技术检测的研究，发现5位点不稳定的患者常见于MMR蛋白表达缺失的肠癌患者中，在16例dMMR的结直肠癌患者中确认了4例（25%）（图6）[3]，其中，BAT-25和BAT-26两个位点检测的灵敏度最高。这也和早期山西省肿瘤医院研究的结论一致：BAT-26 (95.45%) 、BAT-25 (86.36%)（图7）。研究同时指出，荧光PCR检测2B3D位点在中国结直肠癌人群中检出MSI结果和MMR蛋白结果具有最高的一致性，可能是最适合的MSI检测技术[4]。

图6.根特大学医学院的研究

图7.山西省肿瘤医院研究MS位点灵敏度

MSI-H的检出与哪些临床因素相关？

南京医科大学第一附属医院研究结果显示[5]，MSI-H的结直肠癌患者肿瘤通常伴随这些临床病理特征：原发右半结肠癌、低TNM分期、分化程度差、黏液成分等，这些结论也经过国内外多个研究印证。在聚焦于临床分期与MSI-H的相关性上，研究表明，在Ⅱ期结直肠癌中，MSI-H/dMMR 患者约占20%，在Ⅲ期结直肠癌中约占12%，而在Ⅳ期中最少，约占4%［6］。另外，MSI-H的CRC患者中有35%同样携带BRAF V600E突变，而携带BRAF V600E突变的CRC中约21%表现为MSI-H，这类患者更适用于免疫治疗。

总结来说，MSI检测在结直肠癌的治疗和预后指导中至关重要，深受指南推荐。随着MSI-H指标获批用于实体瘤免疫治疗的疗效指导，更多的MSI检测知识也理应受到临床关注。

参考文献：

[1]. 中国临床肿瘤学会结直肠癌专家委员会， 中国抗癌协会大肠癌专业委员会遗传学组， 中国医师协会结直肠肿瘤专业委员会遗传专委会. 结直肠癌及其他相关实体瘤微卫星不稳定性检测中国专家共识 [J] . 中华肿瘤杂志，2019,41 (10): 734-741. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2019.10.003

[2]. Bartels S, Grote I, Wagner M, Boog J, Schipper E, Reineke-Plaass T, Kreipe H, Lehmann U. Concordance in detection of microsatellite instability by PCR and NGS in routinely processed tumor specimens of several cancer types. Cancer Med. 2023 Jun 28. doi: 10.1002/cam4.6293. Epub ahead of print. PMID: 37376830.

[3]. Dedeurwaerdere F, Claes KB, Van Dorpe J, Rottiers I, Van der Meulen J, Breyne J, Swaerts K, Martens G. Comparison of microsatellite instability detection by immunohistochemistry and molecular techniques in colorectal and endometrial cancer. Sci Rep. 2021 Jun 18;11(1):12880. doi: 10.1038/s41598-021-91974-x. PMID: 34145315; PMCID: PMC8213758.

[4].  Bai W, Ma J, Liu Y, Liang J, Wu Y, Yang X, Xu E, Li Y, Xi Y. Screening of MSI detection loci and their heterogeneity in East Asian colorectal cancer patients. Cancer Med. 2019 May;8(5):2157-2166. doi: 10.1002/cam4.2111. Epub 2019 Apr 3. PMID: 30945461; PMCID: PMC6536949.

[5]. 张冬生,封益飞,王勇,等.微卫星不稳定状态与结直肠癌患者临床病理特征的相关性研究[J].中华结直肠疾病电子杂志, 2021, 10(2):5.DOI:10.3877/cma.j.issn.2095-3224.2021.02.004.