【衡道丨笔记】分子病理那些事 荧光原位杂交（FISH）（附下期直播预告）

上期课程回顾

上一期“复旦大学附属中山医院病理科30周年系列公开课”的课程中，侯英勇老师带领大家学习了分子病理那些事之荧光原位杂交（FISH），侯老师和我们分享了病理科的分子技术、回顾了染色体的相关故事，最后详细介绍了FISH相关技术。

内容摘要

 病理科的分子技术

包括：原位杂交、荧光原位杂交、DNA片段分析、Sanger测序、荧光定量PCR、ARMS、微滴数字PCR、NGS。

图1：分子病理常用技术平台

 关于染色体

图2

图3

图4：A：正常染色体末端由端粒保护；B：失去端粒保护的染色体可能会错误地相互拼接，并导致继发的染色体碎裂等不稳定性情况，进而导致造血干细胞等衰竭或肿瘤地发生。

 FISH相关技术

原位杂交的原理：

图5

FISH荧光原位杂交：

生命科学中的“钓鱼”

应用荧光染料标记的DNA/RNA探针，根据碱基互补配对的原则，与变性后的染色体或细胞核靶核酸杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。

图6

FISH探针的种类：

单色探针（single color probe，SC）

双色探针（dual color probe，DC）

多色探针（multi color probe，MC）

多色分离探针（dual color，break apart probe. DC，BCR）

双色单融合探针（dual color，single fusion. DC，SF Trans）

额外信号探针（extra signal. ES）

双色双融合探针（dual color dual fusion probe. DC，DF Trans）

图7

图8：双色双融合探针（DC, DF Trans）

图9：Her2基因FISH检测（双色探针）

图10：Her2基因FISH检测（双色探针）

图11：双色双融合探针

FISH技术特点：

操作简便，检测快速，24小时可以出结果，且结果易观察。

重复性好，空间定位准确。

标本来源丰富：分裂间期、中期细胞，分化、未分化细胞，死亡或存活细胞皆可被检测。

人员培训快

图12：操作流程简图

结果判读（以HER2为例）：

选择细胞核边界完整、无重叠，标记HER2基因的红色信号和标记该基因所在的第17号染色体着丝粒（CEP17）的绿色信号清晰的肿瘤细胞，随机计数至少20个细胞核中双色信号。

图13：左图：HER2基因无扩增；右图：HER2基因扩增

图14：HER2基因IHC与FISH检测对照

FISH临床用途：指导治疗、辅助诊断、鉴别诊断、判断预后

乳腺癌HER2：

20-30%的乳腺癌患者具有HER2基因的高表达（扩增）

预后差，OS和DFS较短（肿瘤负荷大，淋巴结转移几率高，激素受体阴性的比例高，组织学分级差，肿瘤增殖指数高）。

明显受益于Herceptin等靶向药物

内分泌治疗（如他莫昔芬）产生耐药

对CMF方案不敏感，宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药物化疗。

质量控制：

开展FISH检测的实验室有责任确保检测结果的可靠性和准确性。无论哪一种检测方法的开展均需要通过严格的比对验证，也可通过参加外部质量控制活动来实现。

定期对相同组织不同批次染色结果进行重复性分析，检测相关的仪器设备需要定期维护、校验。

建立完善的SOP，做好检测情况的记录和存档工作。

从事FISH检测的实验技术人员和病理医师应进行必要的培训和资格考核。

设计：鹏飞

编辑：yoyi