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1 英文参考 mixed lymphocyte culture[WS/T 203—2001 输血医学常用术语] 2 概述混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)是指将受者和供者的淋巴细胞混合培养数天后,以反应细胞的增殖程度判断两者淋巴细胞相容性的试验[1]。淋巴细胞相容性是组织相容性的指标之一[1]。 3 操作名称混合淋巴细胞培养 4 英文名mixed lymphocyte culture 5 别名MLC 6 用品及准备基本同淋巴细胞毒试验。 7 方法及内容(1) 刺激细胞的处理:有两种方法,一种是将受试细胞悬液用60Co或X射线40Gy照射后的细胞直接接种。另一种是使用丝裂霉素处理。向细胞悬液内加入丝裂霉素(终浓度 40mg/ml),置37℃水浴30min,然后用RPM1640培养液洗涤3次。最后将细胞悬浮于1640培养液中计数,调整细胞数至1×106/ml。 (2) 准备微量加样器,用75%酒精、无菌双蒸水、无菌生理盐水依次各洗3遍。 (3) 预先准备无菌96孔圆底板,写好标签。 (4) 按照双向和单向混合培养的实验设计接种细胞。①双向微量混合淋巴细胞培养 (MLC-D)对照组,AA、BB每孔加A细胞 100μl或B细胞100μl,实验组:AB每孔加A细胞50μl,B细胞50μl。②单向微量混合淋巴细胞培养(MLC-S)。对照组:AAm、BBm每孔加反应细胞50μl,自身刺激细胞50μl;实验组:ABm、BAm每孔加反应细胞50μl,刺激细胞50μl,每孔总液量为100μl,每种组合 3~4个复管。 (5) 培养板置于37℃、含5%CO2湿润空气环境中培养5d。 (6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR,继续37℃培养。 (7) 18h后,用细胞收集器将放射性样品收集于玻璃纤维滤纸上,水洗20s,空吸10s。 (8) 将样品滤纸置于60~80℃烤箱烘干后,移至装有2~3ml闪烁液的测量杯中,待测。 (9) 用β液体闪烁测量仪,测量每份样品的放射性计数(CPM)。 8 结果判读计算刺激指数SI 因本底CPM值都控制在100以下,故本底CPM值可忽略不计。一般无关个体之间MLC的 SI>10。 9 正常值形态计数法: 转化率<10% 同位素计数法:比较cpm得出P>0.05 。 10 化验结果意义肾移植时,活体供肾者的转化率应<10%;尸体供肾者的转化率应为>10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。 11 化验取材血液 12 化验方法细胞免疫测定 13 化验类别免疫学检查 > 细胞免疫测定 14 参考资料《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》 15 参考资料^ [1] 中华人民共和国卫生部.WS/T 203—2001 输血医学常用术语[Z].2001-7-20. |
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