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溶酶体是膜结合细胞器，参与多个细胞过程，如生物分子降解、细胞凋亡、细胞信号传导、细胞代谢和质膜修复。溶酶体标记物可用来高效识别和示踪溶酶体。LysoTracker 标记物特异性识别溶酶体内的酸性内含物，而 CellLight 荧光融合蛋白则靶向溶酶体膜，主要用于溶酶体的定位和示踪。 参见溶酶体标记物选择指南使用细胞染色模拟工具 本页内容：溶酶体简介溶酶体标记物选择指南LysoTracker 溶酶体标记物CellLight 溶酶体融合蛋白相关内容：自噬研究CellLight 试剂细胞器标志物抗体吞噬作用，内吞作用，受体内化 溶酶体简介溶酶体是膜结合细胞器，含有降解生物分子的酶，可降解碳水化合物、脂类、核酸和多肽等等 [1–3]。细胞内分子的消化过程称为自噬，而通过内吞进入细胞内的胞外物质的消化过程称为吞噬作用 [1, 2]。溶酶体还通过吞噬作用参与病毒颗粒或细菌的消化。经研究，溶酶体还参与其他细胞过程，包括胞内胞外物质的细胞内运输、增殖和生长以及细胞代谢的调节 [3]。 溶酶体标记物选择指南 LysoTracker 溶酶体标记物CellLight 溶酶体融合蛋白 LysoTracker Blue DND-22LysoTracker Green DND-26LysoTracker Red DND-99LysoTracker Deep Red靶点酸性细胞器分析方法荧光成像溶酶体定位常用检测通道DAPIFITCTRITCCy5标记LysoTracker BlueLysoTracker GreenLysoTracker RedLysoTracker Deep RedEx/Em (nm)373/422504/511577/590647/668信噪比光稳定性多色标记适用适用适用适用活细胞适用适用适用适用固定细胞不适用不适用不适用不适用可固定否否是否产品规格20 x 50 uL20 x 50 uL20 x 50 uL5 x 50 uL货号L7525L7526L7528L12492 CellLight 溶酶体 - GFPCellLight 溶酶体 - RFP靶点溶酶体膜分析方法荧光蛋白成像溶酶体定位荧光标记FITCTRITC标准检测通道GFPRFPEx/Em (nm)485/520555/584信噪比光稳定性多色标记适用活细胞适用固定细胞否可固定是产品规格1 个试剂盒1 个试剂盒货号C10507C10504 LysoTracker 溶酶体标记物 LysoTracker Blue DND-22LysoTracker Green DND-26LysoTracker Red DND-99LysoTracker Deep Red靶点酸性细胞器分析方法荧光成像溶酶体定位常用检测通道DAPIFITCTRITCCy5标记LysoTracker BlueLysoTracker GreenLysoTracker RedLysoTracker Deep RedEx/Em (nm)373/422504/511577/590647/668信噪比光稳定性多色标记适用适用适用适用活细胞适用适用适用适用固定细胞不适用不适用不适用不适用可固定否否是否产品规格20 x 50 uL20 x 50 uL20 x 50 uL5 x 50 uL货号L7525L7526L7528L12492 CellLight 溶酶体融合蛋白 CellLight 溶酶体 - GFPCellLight 溶酶体 - RFP靶点溶酶体膜分析方法荧光蛋白成像溶酶体定位荧光标记FITCTRITC标准检测通道GFPRFPEx/Em (nm)485/520555/584信噪比光稳定性多色标记适用活细胞适用固定细胞否可固定是产品规格1 个试剂盒1 个试剂盒货号C10507C10504 LysoTracker 溶酶体标记物LysoTracker 是细胞渗透性溶酶体标记物，靶向并示踪活细胞中的酸性细胞器。LysoTracker 标记物由与弱碱性胺结合的荧光基团组成。虽然 LysoTracker 的滞留机制尚未完全明确，但很可能是由于细胞器膜内的质子作用。溶酶体标记物在低 pH 的细胞器中积累，在中性 pH 下仅部分质子化。LysoTracker 系列溶酶体标记物有多种颜色，可与其他荧光标记物共用、进行多色标记 （图 1 和 2）。 图 1.溶酶体和线粒体的多色成像。牛肺动脉内皮细胞 (BPAEC) 与 50 nM LysoTracker Red DND-99 和 75 nM MitoTracker Green FM 在 37°C 下共孵育 30 分钟。即使细胞在 3% 戊二醛中固定 30 分钟后，两种染料都表现出良好的细胞滞留能力。使用惠更斯软件对图像进行去卷积。图 2.溶酶体和内吞作用的多色成像。使用 Hoechst 33342和 50 nM LysoTracker Deep Red在完全培养基中标记 A549 细胞 15 分钟。然后使用预热后的 DPBS 清洗细胞，并在 37°C 下，在含有 40 µg/mL pHrodo Green Dextran 10,000 偶联物的 DPBS 中培养 90 分钟。最后使用标准 DAPI/FITC/Cy5 滤光片组合进行成像。图像伪色设置为 Hoechst 33342（蓝色），LysoTracker Deep Red （红色）和 pHrodo Green Dextran 10,000 偶联物（绿色）。 CellLight 溶酶体融合蛋白CellLight 荧光融合蛋白表达在溶酶体膜上，在活细胞中标记溶酶体，以示踪溶酶体在细胞内的行为动态。CellLight 荧光蛋白由Lamp1（溶酶体相关膜蛋白 1）与 emGFP (图 3) 或 TagRFP (图 4)融合构成 。CellLight 溶酶体膜标志物有绿色或红色荧光融合蛋白可选，可与其他荧光染料和蛋白共用、进行多色标记。荧光在固定和透化后仍会保留。 在自噬溶酶体降解之前，溶酶体膜标志物也可以作为与自噬体融合过程的示踪工具。 点击此处，了解其他自噬标记的更多信息 图 3.使用 CellLight 溶酶体-GFP 进行活细胞成像。使用 200 µM 叔丁基过氧化氢处理表达 CellLight 溶酶体-GFP 的人骨肉瘤 (U2-OS) 细胞，处理时间两个小时。在 37°C 下使用含有 5 µM CellROX Orange 和 2 滴/ml NucBlue 活细胞染色剂的染色液处理细胞 30 分钟。清洗细胞，并使用活细胞成像液成像。图 4.使用 CellLight 荧光融合蛋白进行活细胞成像。表达CellLight Lysosomes-RFP和CellLight MAP4-GFP的人主动脉平滑肌细胞 (HASMC) 进行 Hoechst 33342染色。使用 DeltaVision Core 显微镜和标准 DAPI/FITC/TRITC 滤光片组合进行活细胞成像。 了解有关溶酶体标记物的更多信息 参考文献 Cooper GM (2000).The Cell: A Molecular Approach.2nd edition.Sunderland (MA): Sinauer Associates.Lysosomes. Xu H and Ren Dejian (2016).Annu Rev Physiol.77:57-80.PMID：25668017. Tang T, Yang Zy, Wang D, et al.(2020).Cell and Biosci.10(1):131.PMID：33292489. 资源 Molecular Probes手册细胞骨架蛋白探针——第11章细胞器探针——第12章脂质和膜探针——第13章BioProbes 70 期刊文章焦点文章——深入探究用于细胞器标记的荧光染料研究工具细胞染色模拟工具荧光光谱查看器细胞结构信息 查找应用笔记、网络研讨会、视频、文章等实用资源。 相关仪器和应用EVOS EVOS细胞成像系统活细胞成像固定细胞成像免疫荧光成像显微镜校准细胞分析支持中心 为您的细胞分析实验提供故障排除指南和实用资源。 五步法资源细胞免疫荧光5步法活细胞成像5步法查看所有5步法工作流程 |
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