落叶松中二氢槲皮素纯化及其它黄酮化合物的鉴定,定量

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作者：

付警辉

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摘要：

二氢槲皮素又被称作花旗松素,是存在于自然界里的一种二氢黄酮类化合物,属于维生素PP族.二氢槲皮素的化学结构中含有5个羟基,因此具有抗炎﹑抗氧化,保肝,抗癌﹑抗辐射等多种生物活性,在很多领域被广泛的使用.但是二氢槲皮素的提取因为受到原料,生产工艺及产量的限制,其价格十分昂贵.此外,二氢槲皮素样品中,除了含量最高的二氢槲皮素之外,是否还有一些其它的物质,它们的含量是多少,它们在各种生物活性中是否也起到了作用,是促进作用还是抑制作用,这些都成为了现在研究的一个热点. 本论文主要研究了以长白落叶松的树根部分为原料,用水做溶剂,按照料液比1:10,60℃热回流渗漉法提取.甲基叔丁基醚萃取,用冷却结晶的方法进行纯化,得到2种长白落叶松的二氢槲皮素提取物,它们的纯度为78%和92%.并对这2种提取物进行了残留物的测定,2种提取物中都不含甲基叔丁基醚. 利用HPLC-MS/MS对二氢槲皮素提取物的样品1(即纯度为78%),样品2(纯度是92%)和样品3(纯度是92%)进行定性分析.结果显示长白落叶松的2个二氢槲皮素提取物中所含的黄酮类物质是一致的,都包含二氢槲皮素,香橙素,圣草酚,槲皮素和山奈酚这5种黄酮类物质.兴安落叶松二氢槲皮素提取物中除上述5种黄酮类物质之外还含有松属素和柚皮素. 应用HPLC-UV对二氢槲皮素提取物的样品1,2和3进行定量分析.实验结果表明在长白落叶松二氢槲皮素提取物的样品1中(即纯度为78%),二氢槲皮素的含量是78.16%;香橙素是2.92%;圣草酚为:1.08%;槲皮素的含量是2.36%;山奈酚是0.30%.长白落叶松二氢槲皮素提取物的样品2中(即纯度为92%),二氢槲皮素的含量是92.07%;香橙素为2.39%;圣草酚是0.19%;槲皮素为0.053%;山奈酚的含量是0.045%.在兴安落叶松二氢槲皮素提取物的样品3中(即纯度为92%),二氢槲皮素的含量是92.11%,香橙素是1.71%,圣草酚是0.35%,松属素是0.0006%,柚皮素是0.12%,槲皮素的含量是0.008%,山奈酚的含量是0.005%.同时,利用葡聚糖凝胶柱LH-20分离纯化样品1,得到除二氢槲皮素以外的另一种黄酮类物质的单体,即槲皮素. 研究了长白落叶松的2种二氢槲皮素提取物和兴安落叶松二氢槲皮素提取物的抗氧化活性和对酪氨酸酶的抑制作用.清除DPPH,ABTS+·自由基和还原力三个抗氧化实验结果表明,不同种类落叶松中,二氢槲皮素的纯度相同时,兴安落叶松二氢槲皮素提取物的抗氧化活性比长白落叶松二氢槲皮素提取物要强;相同种类落叶松,二氢槲皮素的纯度不同时,长白落叶松提取物中二氢槲皮素的纯度越高,抗氧化性越好.这个结果说明对于抗氧化,在提取物中,二氢槲皮素起到主要作用,但其它黄酮类成分对于抗氧化也起到部分作用.对照品BHT的抗氧化性要弱于二氢槲皮素提取物,这是由于二氢槲皮素的分子结构所决定的.抑制酪氨酸酶的实验,二氢槲皮素纯度相同时,长白落叶松二氢槲皮素提取物对酪氨酸酶的抑制作用要好于兴安落叶松.这可能是由于它们的提取物中所含黄酮类成分不同或者是除二氢槲皮素外其它相同黄酮类成分的不同含量导致的;相同种类落叶松二氢槲皮素提取物中,纯度不同时,低浓度下,提取物中二氢槲皮素的纯度高的效果好;在高浓度时,二氢槲皮素的纯度低的效果好.这可能是在不同纯度的二氢槲皮素提取物中,除了二氢槲皮素外,还含有其他提取成分,由于它们在提取物中的不同含量所致.长白落叶松二氢槲皮素提取物的抑制机理表现为竞争性抑制型,其抑制常数KI=0.017.BHT在浓度0.01g·L-1时对酪氨酸酶起到了相反的促进作用,不适合做化妆品的美白添加成分.熊果苷在0.01g·L-1时,对酪氨酸酶的抑制作用达到了100%,但是由于它具有细胞毒性,所以二氢槲皮素提取物更适合做化妆品的美白成分.本文还研究了长白落叶松二氢槲皮素提取物对促进盐酸肾上腺素诱导的离体脂肪组织分解的作用.结果表明在长白落叶松二氢槲皮素提取物中,二氢槲皮素纯度低的提取物对促进盐酸肾上腺素诱导的离体脂肪组织分解有微弱的作用,而二氢槲皮素纯度高的提取物没有作用.长白落叶松二氢槲皮素提取物对促进盐酸肾上腺素诱导的离体脂肪组织分解的作用机制有待进一步研究.

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关键词：

长白落叶松 二氢槲皮素 定性定量 黄酮 生物学活性

年份：

2014