Toll

   在类Toll受体中，TLR4是主要的脂多糖(LPS)受体，并且TLR4被LPS激活。

   MyD88-和TRIF-依赖的信号通路被连续触发，并偶联LPS激活的TLR4从质膜到胞内体重新分配。

   TLR4在细胞内部的易位及其进一步的溶酶体降解促进了炎症反应的终止。

   高表达于胎盘、脾脏和外周血白细胞。

   TLR4主要在髓系来源的免疫细胞中表达，包括单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞(DC)，也在一些非免疫细胞中表达，如内皮细胞。

   在脂多糖刺激下，与RFTN1在细胞膜上共定位，然后与RFTN1一起移动到核内体。

   人（O00206）：异构体 1-2：90-95.7 kDa（预测）                           异构体 3：73.3 kDa（预测）

   小鼠（Q9QUK6）：95.5 kDa（预测）

   大鼠（Q9QX05）：96 kDa（预测）

   糖基化、泛素化和磷酸化

​WB实验贴士

   由于TLR4在人中有多个异构体，并且容易被降解，因此WB检测时可能会出现多条条带。

   不同的细胞和组织样本中，TLR4的表达水平和剪切或降解产物可能不同。

   由于TLR4容易被剪切和降解，因此在样本中可能检测不到全长的TLR4蛋白。推荐不要裁膜，保留全膜进行实验，防止丢失目的蛋白信号。

   推荐使用新鲜制备的裂解液，并添加复合蛋白酶抑制剂，防止蛋白降解产生杂带。

   TLR4的预测分子量在95 kDa左右，由于存在糖基化等翻译后修饰，实际检测到的条带大小可能比预测分子量要大，并且可能存在多条条带现象。

   TLR4过表达的293T全细胞裂解液(ab94063)

   小鼠肝脏组织裂解液

关键控制点

     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本制备

     使用复合蛋白酶抑制剂防止靶标蛋白被降解。

     整个样本制备过程中，保持样本置于冰上。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

   电泳

     对于分子量较大的靶标蛋白，推荐使用8%浓度的分离胶进行电泳。

     至少上样20μg总蛋白进行电泳。

   转膜

     推荐使用0.42μm PVDF膜。

     强烈建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功。