一文详细介绍he染色的基本原理、实验步骤及注意事项

一文详细介绍he染色的基本原理、实验步骤及注意事项

HE染色法，又称苏木素-伊红染色法，是一种广泛应用于组织学、胚胎学和病理学教学与科研中的染色方法。

一、基本原理

HE染色法利用两种染料，即碱性染料苏木素和酸性染料伊红，分别与细胞核和细胞质发生作用，使细胞的微细结构通过颜色改变其折光率，从而在光镜下清晰地呈现出细胞图像。染色过程中既有化学反应，又有物理作用参与。

从化学反应来看，组织细胞内含有酸性物质和碱性物质。细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子结合，细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离子结合。因此，酸性细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红色。从物理现象来看，主要有吸附和吸收之说。HE染色提供良好的核浆对比染色，是细胞化学染色中最常用的一种方法。

二、实验步骤

1. 样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1105/ml，滴加于盖玻片上（置于6孔板中），培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。

2. 样品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。

3. 染核：苏木素染液染色2-3min，自来水洗涤。

4. 分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1%盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。

5. 染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。

6. 吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。

若细胞用4%多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。

三、注意事项

1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行。一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，重新脱水。

4. 脱蜡。切片脱蜡后才能染色，且脱蜡应彻底。脱蜡好坏主要取决于二甲苯的温度和时间。如果二甲苯是用过一段时间，切片又比较厚，室温低应增加脱蜡时间。

5. 在染色过程中，各种试剂的使用顺序、浓度和时间应严格按照实验步骤操作，以免影响染色效果。

6. 实验结束后，要清洁实验台和仪器设备，妥善保存试剂，以免影响下次实验。