苏木精/伊红染色实验（H&E）原理和Protocol

原标题：苏木精/伊红染色实验（H&E）原理和Protocol

今天小笔为大家带来的是个小小的实验，虽然小，而且很多时候采用自动染色机能帮你实现，但是，原理及试剂的配置仍然是学习的要点哦，小白们还是要搞搞清楚哒~~~~所以，这主要是一篇戳原理的推文，嘿嘿

原 理

H&E (hematoxylin-eosin staining)染色是较为成熟的实验技术，应用广泛，是组织学及病理学检查的基本方法。

针对的是石蜡切片的样本（注意哦，有的小伙伴会用冰冻切片的片子去做，这是不好的！因为冰冻切片一般较厚，会使得染色结果不能够判断，太厚了啦！！！）

苏木精染料呈碱性，能够把细胞核内染色质与胞浆内的核酸（称为嗜碱性部分）染为蓝紫色；而伊红为酸性的染料，能将嗜酸性部分比如细胞质核细胞外基质中的成分染为红色。

细胞核内DNA很容易与苏木精以离子键结合，使得细胞核被染为蓝色。伊红在水中电离后带阴离子，可以与蛋白质结合，使得比如细胞浆、红细胞、结缔组织等染红色。

通过苏木精染色处理后，再利用伊红染胞浆，从而使得各组分呈现出鲜明的对比色，从而可以明确的看出各种组织的病变。

步 骤

1. 试剂配置：

哈瑞（Harris）苏木素液

A液：苏木素1 g 无水酒精10 ml

B液：硫酸铝钾20 g 纯净水200 ml

配制方法：

称取KAlSO4·12 H2O 36.72 g及苏木素1 g，分别溶解后混合，加热煮沸后，徐徐加入红色氧化汞0.5 g，此时有大量气泡产生（故容器宜大，以防液体溢出），然后将染液迅速冷却，冷却后过滤。每100 ml加入冰醋酸6 ml，并加入甘油（丙三醇）10 ml。混匀后即可使用。

2. 染色步骤：

1）取组织的石蜡切片，二甲苯脱蜡，经乙醇逐步脱水：二甲苯（I）5 min；二甲苯（II）5 min; 100％乙醇2 min；95％的乙醇1 min；80％乙醇1 min；75％乙醇1min；蒸馏水洗2 min（各两次，然后把水吸干）。

2）苏木素染色5 min，自来水冲洗（吸干水）。

3）盐酸乙醇分化30 s（提插数下）。

4）自来水浸泡15 min（吸干水）。

5）置伊红液2-3 min。

6）常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）30 s；95％乙醇（Ⅱ）30 s；100％乙醇（I）30 s；100％乙醇（Ⅱ）1min；二甲苯15 min；中性树脂封片。

好哒，播报到此，大实验要学，小实验也要做，大家都棒棒哒

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