GraphPad Prism 10 Curve Fitting Guide

绝对IC50的概念并不标准，许多人认为没有用，通过拟合曲线来确定它并不难。本EPA文件给出了所需的方程（我对其进行了一点概括，因此无需对数据进行标准化）。

五十=（顶部+基线）/2

Y=底部+（顶部-底部）/（1+10^（（LogIC50-X）*Hill斜率+log（（顶部-底部）/（五十-底部）-1）））

注意两项参数之间的区别 底部 和 基线。 底部 是曲线自身底部稳定段的Y值。 基线是定义标准药物0%最大抑制的Y值。您肯定会想约束 基线 成为基于质控的常数值。可能还想约束 顶部。

下载与方程拟合的Prism文件，形成上述图表。将数据拟合到该方程时，不要忘记将基线和顶部限制在由质控确定的适当值。此外，文件包含另一张图表，其中数据已标准化为从0到100%。这些数据符合一个更简单的方程，其中基线设置为零，顶部设置为100。这些与方程均是紧密相连的，因此无需记住将这两项参数限制为常数值。

如果数据是标准化的，这里有另一种方法可使用。

1.确保您的数据标准化到某些质控。这意味着左端的反应（低浓度）接近100%，高浓度的反应高于0%。如果反应稳定在0%，则绝对和相对IC50是相同的，只需拟合通常的剂量反应曲线即可得到IC50。

2.在数据表的底部，添加新的数据行。在每个Y列中输入50，将此行的X留空。

3.使用非线性回归将数据拟合到log（抑制剂）与反应（可变斜率）曲线。

4.在非线性回归对话框的第一个（拟合）选项卡上，选中选项：“从标准曲线内推未知数。”当然，这些数据不是标准曲线，还有未知数。但Y=50时，该选项要求Prism内推曲线的X值。

5.在限制选项卡上，考虑将顶部限制为常数值100。如果进行了良好控制来标准化数据，则您知道曲线稳定段必须是Y=100，因此应告诉Prism使用该限制。

6.作为主要结果表一部分报告的IC50将是相对IC50。

7.Y=50时，查看内推结果的附加结果页面，查看X的值，这是绝对IC50。

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