胰腺癌CFPAC1细胞增殖诱导配体基因shRNA慢病毒表达载体的构建

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作者：

陈琳，王峰，邵建国，毛振彪

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摘要：

目的构建针对人胰腺癌细胞株CFPAC1增殖诱导配体(a proliferation—inducing ligand,APRIL)基因的shRNA慢病毒表达载体。方法应用基因工程技术,筛选出针对APRIL基因的RNAi靶序列,与pGCL—GFP载体连接,构建慢病毒表达载体LV—shAPRIL;将连接产物转化到DH5a感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定。再用LV—shAPRIL、pHelper1.0、pHdper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒。重组慢病毒感染CFPAC1细胞,实时定量PCR和Western blotting检测CFPAC1细胞APRIL mRNA和蛋白的表达。结果PCR和测序结果与构建的慢病毒载体的预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为5×10^7Tu/ml。构建的慢病毒载体感染CFPAC1细胞后第4天、第4周和第8周,APRIL mRNA表达量较空载体慢病毒感染组分别下降了73%、70%和71%;APRIL蛋白表达量分别下降了66%、63%和62%(P〈0.05)。而各时间段未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无明显差异(P〉0.05)。结论成功构建了APRIL基因的shRNA慢病毒表达载体LV—shAPRIL。

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关键词：

RNA干扰 慢病毒属 增殖诱导配体 细胞系 肿瘤 RNA interference Lentivirus APRIL Cell line tumor

被引量：

2

年份：

2008