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估计溶液中蛋白质含量的最快方法是使用UV-vis直接测量吸光度，但这通常不是很准确或敏感。使用Bradford或双辛酸(BCA)测定可以对大多数蛋白质进行高度准确的定量。 下表总结了这些不同方法之间的主要区别。 UV-vis / A280Bradford测定BCA 测定准确性低;通常用作近似值 高;给出准确的定量 高;给出准确的定量 速度非常快;< 1分钟 快;20分钟 1小时30分钟 化学成分色氨酸和酪氨酸残基在280 nm处吸收 Bradford试剂与蛋白质的结合;配合物在595 nm处吸收 蛋白质将Cu2+还原为Cu+;BCA螯合Cu+;配合物在562 nm处吸收 注意事项如果DNA/RNA大量存在，会干扰结果;核酸在260纳米处吸收 不能检测没有色氨酸和酪氨酸氨基酸的肽 应避免使用SDS(> 0.1%)和其他洗涤剂 应避免使用EDTA (>10 mM)等强螯合剂 应避免使用还原剂 如果需要还原剂，我们提供还原剂兼容配方:ab207003和ab207004UV-vis / A280蛋白质浓度可以通过测量280 nm处的紫外吸光度来估计;由于色氨酸和酪氨酸残基(通常称为A280)的吸收，蛋白质在这里显示出一个强烈的峰值。这可以很容易地转换为蛋白质浓度使用比尔-兰伯特定律(见下式)。这种方法主要用于非常粗略的浓度估计，例如检查纯化是否成功。 A =ɛcl A是吸光度(如A280) ɛ是摩尔消光系数，M-1cm-1 -这可以从文献中找到 c是M中的浓度 L为路径长度，单位为cm -比色皿/微皿的长度 回到顶部 Bradford测定Bradford测定是一种比色法，依赖于蛋白质与考马斯亮蓝的结合。 当染料在酸性介质中与蛋白质结合时，吸收最大值发生从465 nm到595 nm的变化，颜色从棕色变为蓝色。 未知蛋白质的浓度是通过参考已知浓度蛋白质的标准曲线来估计的，通常是牛血清白蛋白(BSA)。参见我们的Bradford化验试剂盒 回到顶部 BCABCA测定法是一种比色测定法，利用蛋白质还原Cu2+离子，随后结合BCA。 生成的Cu+离子与BCA试剂形成强烈的颜色配合物，在562 nm处具有很强的吸光度 未知蛋白质的浓度是通过参考已知浓度蛋白质的标准曲线来估计的，通常是牛血清白蛋白(BSA)。浏览我们的BCA检测范围 回到顶部 |
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