实验 酵母RNA的分离及组分鉴定

※实验六 酵母RNA的分离及组分鉴定

【实验目的】

了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。

【实验原理】

酵母核酸种RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。由此即得到RNA的粗制品。

核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。

鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。

【实验器材】

150 ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶 、吸管 7、滴管8、试管及试管架 9、烧杯 、离心机、漏斗

【试剂和材料】

1、 0.04 mol/L氢氧化钠溶液；

2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中；

3、95%乙醇；

5、1.5 mol/L硫酸溶液；

6、浓氨水；

7、0.1 mol/L硝酸银溶液；

8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10% 三氯化铁溶液（用FeCl3・6H2O配制）加入到400 ml浓盐酸中；

9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95% 乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；

10、定磷试剂：（1）17% 硫酸溶液：将19 ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 ml水中（2）2.5% 钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10% 抗坏血酸溶液：10 g抗坏血酸溶于100 ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。17% 硫酸溶液：2.5%

钼酸铵溶液：10% 抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2 (V/V)；

11、酵母粉。

【实验操作】

1、溶解RNA

将5 g酵母悬浮于90 ml 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液于150 ml锥形瓶中，在沸水浴中加热30分钟，制成碱提取液，将其冷却。

2、解聚RNA

将冷却的碱提取液离心（6000ｒ/min）5分钟，将上清液用乙酸调节pH至酸性（pH5~6））缓缓倾入30 ml乙醇溶液中，注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（6000ｒ/min）5分钟。弃去清液。

3、洗涤沉淀，抽滤得RNA

采用倾倒法用95% 一次，即得RNA 。

4、RNA各组分鉴定

（1）水解液制备

取200 mg提取的核酸，加入1.5 mol/L硫酸溶液10 ml，在沸水浴中加热10分钟后即得核酸水解液。

（2）组分鉴定

① 嘌呤碱的鉴定

取水解液1 ml加入过量浓氨水，然后加入约1 ml 0.1 mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的白色银化合物沉淀。

② 核糖的鉴定

取1支试管加入水解液1 ml，三氯化铁浓盐酸溶液2 ml和苔黑酚乙醇溶液0.2 ml。放沸水浴中10分钟。溶液变成绿色，说明核糖的存在。

③ 磷酸的鉴定

取1支试管加入水解液1 ml和定磷试剂1 ml，在水浴中加热，溶液变成蓝色，说明有磷酸的存在。

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一目的了解核酸的组分并掌握鉴定核酸组分的方法二原理酵母核酸中RNA含量较多RNA可溶于碱性溶液在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀由此即得到RNA的粗制品核糖核酸含有...

生物化学实验实验报告实验三酵母核糖核酸的提取及测定生物103班10020xx310赵宁宁搭档10020xx301井恬一研究背景及目的核酸是生命的最基本物质之一广泛岑在于所有动植物细胞微生物体内对核酸的研究是更深...

实验三黄柏中小檗碱的提取分离与鉴定一实验目的要求学习和掌握小檗碱的结构特点和特殊的理化性质及小檗碱的一般提取精制方法二实验的基本原理1小檗碱的提取原理根据水溶性季铵碱在乙醇和碱水中溶解度大性质利用乙醇回流法和碱...

氨基酸鉴定纸层析法醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白一实验目的1掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法2学习氨基酸纸层析法的基本原理3掌握氨基酸纸层析的操作技术二实验原理二实验原理1氨基酸的分离鉴定纸层析法...

实验目的1学习氨基酸纸层析法的基本原理2掌握氨基酸纸层析的操作技术实验原理纸层析法paperchromatography是生物化学上分离鉴定氨基酸混合物的常用技术可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定也是...

Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定实验目的1从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株2通过从土壤中分离纯化菌株掌握培养基的制备与灭菌技术微生物的筛选分离纯化方法和无菌操作技术3复习以前学过的...

实验四质粒DNA的提取纯化与鉴定DNA体外重组技术实验原理是在分子水平上根据人们的需要以人工的方法取得感兴趣的目的基因在体外与载体DNA分子重组然后将重组分子转入受体细胞并筛选出能表达重组DNA的活细胞加以纯化...

目录1选题的根据22文献综述53研究内容及试验方法64实验装置及药品75实验目标76实验进度安排77主要文献资料81天然药物化学开题报告莪术醇的额提取分离及鉴定一选题的根据一莪术的简介姜科植物主要用药部位为根茎...

实验一氨基酸的分离与鉴定滤纸层析法目的要求1通过实验了解氨基酸滤纸层析法的原理2掌握氨基酸滤纸层析的操作方法原理滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析它也并存着吸附和离子交换作用滤纸纤维上羟基具有亲水性因此吸...

实验七氨基酸的分离鉴定纸层析法一目的通过氨基酸的分离学习纸层析法的基本原理及操作方法二原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法惰性支持物是...

实验11氨基酸的薄层层析分离和鉴定一实验目的1理解薄层层析原理2掌握薄层层析技术3学会氨基酸的较为精确的定性二实验原理1层析技术亦称色谱技术是一种物理的分离方法它是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别如溶解度...

氨基酸的分离鉴定―纸层析法，内容附图。

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告（3篇）