DNA尿素PAGE电泳试剂盒

2024-07-08 01:14| 来源: 网络整理| 查看: 265

本制品是专门用于DNA尿素-PAGE变性电泳的试剂盒。

一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。可用于DNA测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase保护实验等。电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。本制品足够30次mini尿素-PAGE胶（10cm×10cm）实验。本制品只能用于科研。

组分规格尿素2×105g丙烯酰胺:甲叉双丙烯酰胺(29:1)，电泳级62g TBE电泳液，10×250mLTEMED1.5mL 过硫酸铵1g 2×尿素-PAGE变性胶上样液1.5mL保存：常温，有效期一年，其中2×尿素-PAGE变性胶上样液收到后置于4℃保存。

一、PAGE浓度和交联度的选择指南

尿素-PAGE变性胶一般使用29:1（丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺）的交联度，在此交联度的条件下，DNA片段长度和最适PAGE浓度对应关系如下：单链DNA长度最佳PAGE浓度二甲苯青FF迁移率对应的DNA长度溴酚蓝迁移率对应的DNA长度50～400nt8%160nt45nt200～1000nt5%260nt65nt750～2000nt3.5%460nt100nt

二、制备尿素-PAGE变性胶此处以配制100mL尿素-PAGE变性胶为例，如果配制体积不同，则各成分用量需要按比例调整。

新鲜配制10%的APS（过硫酸铵）：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL去离子水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周，超过一周必须弃之不用。配制40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（29:1，简称AB溶液，下同）：在装有丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺干粉的250mL棕色塑料瓶中加入120mL自备的去离子水，颠倒摇晃溶解后，即得40%的AB溶液。注意：丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。配尿素-PAGE变性胶：在一个干净的250mL玻璃三角瓶中，按下表的用量加入各成分。注意：丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。需要配制的PAGE胶浓度所需各成分的用量补水到尿素40%AB溶液10×TBE缓冲液5%42g12.5mL5mL100mL6%15.0mL7%17.5mL8%20.0mL9%22.5mL10%25.0mL11%27.5mL12%30.0mL搅拌直到所有成分溶解，然后用滤纸过滤。抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气，因为氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应。无条件抽真空也可以跳过此步。加入500μL 10%APS和100μL TEMED后，迅速摇匀后灌胶。在PAGE胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。室温聚合30～60分钟。不能放低温，低温会抑制聚合反应。拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。

三、DNA样品的准备

对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟2×尿素-PAGE上样液1:1混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。对TGGE样品：可以不加上样液直接放冰上待用。

四、电泳

将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。预电泳30分钟，使得PAGE胶发热后，将冰上放置的样品上样。连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择固定功率进行电泳。固定功率等于固定产热，这样就不容易发生过热而发生PAGE胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热将随电泳时间而变化，不好控制。对小胶一般用5-6W的固定功率，大胶用15-25W的固定功率。终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则胶中残留的尿素会严重干扰后面的银染。相关搜索：DNA尿素PAGE电泳试剂盒，尿素PAGE，DNA电泳，One-Stop DNA Urea-PAGE Pack

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