FTA卡采集和常温保存肋软骨组织的方法

肋软骨是尸体检验中的常见检材, 从肋软骨组织中提取DNA检验STR分型是对未知名尸体进行尸源鉴定的重要手段。本方法采用FTA卡常温干燥保存肋软骨组织, 相对优于其他的保存方式。目前, 肋软骨常采用冷冻保存, 这种方法保存检材难度大, 既浪费电力又占用冰箱, 如保存不当易造成检材腐败, 导致DNA降解。如将肋软骨切薄片后保存, 则需要对该薄片进行干燥, 此方法对检材保存环境要求较高, 不适用于南方湿度大、气温高的环境。赵凯等[10]采用弹夹式尸体肋软骨包装盒保存肋软骨组织, 可以吸附腐臭气味, 但亦不能实现常温保存。相对于传统送检方式, 本方法可常温送检, 安全方便。特别是肋软骨FTA卡的制备不受时间、地域的限制, 可以在案件现场、尸体解剖室、实验室等区域制作完成, 无需将肋软骨送到DNA实验室, 送检过程中避免了有害病原菌的传播[8], 从而保证了DNA实验室的洁净卫生, 可以有效避免检材相互污染, 还可以减少对检验人员的危害。

DNA检验人员在收到肋软骨FTA卡后, 打孔直接扩增即可, 省去了繁琐的消化过程, 大大节省了提取时间。在实验过程中, 可通过打孔器孔径的大小和打孔纸片的数目来控制扩增的DNA模板量。同时, 采用FTA卡保存肋软骨组织不影响DNA二次纯化, 对于杂质多的检材, 可通过水洗法快速纯化, 亦可采用其他方法如硅珠法对肋软骨DNA进行二次纯化和提取, 以获得更高质量的模板DNA。FTA卡上的肋软骨组织常温保存两年检出率能达到100%, 未见等位基因丢失现象, 证实了FTA卡保存肋软骨DNA的有效性, 已满足日常物证送检与保存的需求。当然, 由于DNA在保存过程中会存在降解, 上述结果呈现刚制成的肋软骨FTA卡直接扩增图谱在PCR产物峰高波动范围、同一基因座上杂合间峰值比、同一荧光染料不同基因座间的均衡性等好于两年后的肋软骨FTA卡直扩结果的现象。本研究中的158份肋软骨组织通过常规方法（Chelex-100法）提取, 均得到了完整的STR分型, 将其全部转移到FTA卡上, 直接扩增, 有147份肋软骨FTA卡得到了完整的STR分型, 有11份FTA卡未检出有效的STR分型。这11份属于高度腐败尸体肋软骨, 采用常规的Chelex-100法提取需要加大检材的量, 否则也不能检出有效STR分型。高度腐败尸体肋软骨组织DNA含量低, 采用本方法不适用于直扩。

采用FTA卡保存肋软骨组织, 可以克服低温保存的局限性, 为常温下远距离运输提供了条件, 提升了保存的有效性和运输的安全性。截至目前, 肋软骨组织可在FTA卡上保存两年, 至于保存时间更长的肋软骨组织是否适用, 还有待进一步实验验证。